Пользовательский поиск

Критерии жизнеспособности гепатоцитов

Жизнеспособность изолированных гепатоцитов — собирательное понятие, под которым подразумевается способность клеток в усло­виях in vitro воспроизводить множественные метаболические функ­ции, свойственные печени in vivo. Оценка их жизнеспособности является очень непростым вопросом, вызвавшим оживленную дис­куссию в научной литературе.


Клетки печени чрезвычайно чувствительны к процедуре выделения, от которой зависит не толь­ко количество полученных гепатоцитов, но и их метаболические свойства. Однако по чисто техническим причинам невозможно в каждом эксперименте проводить анализ различных морфологиче­ских, метаболических и функциональных параметров, которые опре­делили бы, насколько данные клетки сохранили специфические свойства, присущие печени in vivo. Отсюда стремление эксперимен­таторов оценивать состояние гепатоцитов по ограниченному числу параметров, максимально коррелирующих с ними. Поэтому главные требования, которым должны отвечать критерии жизнеспособ­ности, — это быстрота и простота их получения, сочетающиеся с высокой информативностью и специфичностью.

Для многих видов клеток — как свободноживущих (яйцеклеток, сперматозоидов, лимфоцитов и т.п.), так и изолированных из тка­ни (жировых, энтероцитов), оценка их жизнеспособности сводится практически к определению интактности их плазматической мем­браны с помощью тех или иных витальных красителей, и в первую очередь трипанового синего. Для гепатоцитов же с их многочислен­ными метаболическими системами и крайне сложными взаимоотно­шениями между ними понятие «жизнеспособность» включает в себя как интактность плазматической мембраны, так и сохранение инте­грированности клеточного метаболизма.

По этим причинам в настоящее время функционально-метаболи­ческий статус гепатоцитов определяется, как правило, набором те­стов.

Морфологические критерии жизнеспособности изолированных гепатоцитов

Морфологический контроль должен визуально подтверждать со­хранение интактности структуры клетки и тканевоспецифическую ее принадлежность. И то и другое необходимо для воспроизведения in vitro клеточных реакций, свойственных печени in vivo.

Согласно описанию многих исследователей изолированные интактные гепатоциты сохраняют ту же ультраструктуру, что и паренхиматозные клетки печени в организованной ткани. Они имеют правильную округлую форму с центральным ядром; четко очерченную плазматическую мембрану с микроворсинками, играющими существенную роль в гормональном ответе клетки; большое количе­ство цитоплазмы, насыщенной хорошо сохраненными внутриклеточ­ными органеллами. К последним относятся многочисленные митохондрии с кристами, параллельно расположенные мембраны эндоплазматического ретикулума, аппарат Гольджи, пероксисомы, лизосомы, желчные канальцы. В цитоплазме показаны обильные и равномерные включения розеток гликогена, вкрапления липидов.

Различные и даже, казалось бы, несущественные воздействия на клетку очень быстро приводят к изменению ее ультраструктуры. Например, гепатоциты, инкубируемые при 0°С, сохраняли интакт­ность плазматической мембраны и не прокрашивались трипановым синим, но митохондрии теряли кристы и в них существенно увели­чивалось количество вакуолей. То же самое происходило при инкубации гепатоцитов в среде без кальция и при наличии аноксии в процессе выделения.

Визуальная и фазово-контрастная микроскопия не всегда вы­являют повреждения плазматической мембраны и тонкие морфоло­гические изменения внутренней структуры клетки, хотя в отдельных случаях они могут быть обнаружены и таким спо­собом. Однако соответствующие изменения, коррелирующие с состоянием плазматической мембраны, всегда удается установить при изучении ультратонкой структуры клетки с помощью электронной микроскопии.

Более грубые нарушения ультраструктуры (появление разрывов плазматической мембраны, набухание наружной мембраны мито­хондрий и пр.) сопровождаются, как правило, прокрашиванием клетки трипановым синим и могут быть выявлены с помощью све­товой микроскопии. Прокрашенные клетки теряют почти все мета­болические функции.

Таким образом, характеристика тонкой ультраструктуры клетки дает достаточно точную информацию о корреляции между морфо­логией и функциональным ее состоянием, а также о ее интактно­сти. Однако использование электронного микроскопа для получе­ния этих характеристик представляет собой довольно трудоемкий и длительный процесс, который к тому же не дает возможности при­менить статистику. Поэтому, не отрицая необходимости периодиче­ского цитоморфологического контроля за получаемыми изолирован­ными гепатоцитами, следует, видимо, признать, что он не может быть использован как рутинный метод для наблюдения за быстрыми изменениями в клетках в процессе эксперимента и для оценки при этом их жизнеспособности.

Следует отметить также, что метаболические нарушения могут иметь место и в тех случаях, когда они не выявляются с помощью электронной микроскопии.




nazdor.ru
На здоровье!


Пользовательский поиск

Узнайте больше:



Большинство диет для похудения просто крадут ваши деньги


Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проекте Карта сайта β На здоровье! © 2008—2017 
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".