Пользовательский поиск

Критерии жизнеспособности гепатоцитов

Жизнеспособность изолированных гепатоцитов — собирательное понятие, под которым подразумевается способность клеток в усло­виях in vitro воспроизводить множественные метаболические функ­ции, свойственные печени in vivo. Оценка их жизнеспособности является очень непростым вопросом, вызвавшим оживленную дис­куссию в научной литературе.

Продолжение ниже

Метаболические параметры оценки жизнеспособности изолированных гепатоцитов

... адениннуклеотидов, отношение АТФ/АДФ и концентрация АТФ в изолированных гепатоцитах как критерии их жизнеспособности Параметры адениловой системы ... ... качестве биологической модели для изучения специфических особенностей метаболизма печени. Так, например, инкубация гепатоцитов с бромбензеном,...

Читать дальше...

всё на эту тему


Клетки печени чрезвычайно чувствительны к процедуре выделения, от которой зависит не толь­ко количество полученных гепатоцитов, но и их метаболические свойства. Однако по чисто техническим причинам невозможно в каждом эксперименте проводить анализ различных морфологиче­ских, метаболических и функциональных параметров, которые опре­делили бы, насколько данные клетки сохранили специфические свойства, присущие печени in vivo. Отсюда стремление эксперимен­таторов оценивать состояние гепатоцитов по ограниченному числу параметров, максимально коррелирующих с ними. Поэтому главные требования, которым должны отвечать критерии жизнеспособ­ности, — это быстрота и простота их получения, сочетающиеся с высокой информативностью и специфичностью.

Для многих видов клеток — как свободноживущих (яйцеклеток, сперматозоидов, лимфоцитов и т.п.), так и изолированных из тка­ни (жировых, энтероцитов), оценка их жизнеспособности сводится практически к определению интактности их плазматической мем­браны с помощью тех или иных витальных красителей, и в первую очередь трипанового синего. Для гепатоцитов же с их многочислен­ными метаболическими системами и крайне сложными взаимоотно­шениями между ними понятие «жизнеспособность» включает в себя как интактность плазматической мембраны, так и сохранение инте­грированности клеточного метаболизма.

По этим причинам в настоящее время функционально-метаболи­ческий статус гепатоцитов определяется, как правило, набором те­стов.

Морфологические критерии жизнеспособности изолированных гепатоцитов

Морфологический контроль должен визуально подтверждать со­хранение интактности структуры клетки и тканевоспецифическую ее принадлежность. И то и другое необходимо для воспроизведения in vitro клеточных реакций, свойственных печени in vivo.

Согласно описанию многих исследователей изолированные интактные гепатоциты сохраняют ту же ультраструктуру, что и паренхиматозные клетки печени в организованной ткани. Они имеют правильную округлую форму с центральным ядром; четко очерченную плазматическую мембрану с микроворсинками, играющими существенную роль в гормональном ответе клетки; большое количе­ство цитоплазмы, насыщенной хорошо сохраненными внутриклеточ­ными органеллами. К последним относятся многочисленные митохондрии с кристами, параллельно расположенные мембраны эндоплазматического ретикулума, аппарат Гольджи, пероксисомы, лизосомы, желчные канальцы. В цитоплазме показаны обильные и равномерные включения розеток гликогена, вкрапления липидов.

Различные и даже, казалось бы, несущественные воздействия на клетку очень быстро приводят к изменению ее ультраструктуры. Например, гепатоциты, инкубируемые при 0°С, сохраняли интакт­ность плазматической мембраны и не прокрашивались трипановым синим, но митохондрии теряли кристы и в них существенно увели­чивалось количество вакуолей. То же самое происходило при инкубации гепатоцитов в среде без кальция и при наличии аноксии в процессе выделения.

Визуальная и фазово-контрастная микроскопия не всегда вы­являют повреждения плазматической мембраны и тонкие морфоло­гические изменения внутренней структуры клетки, хотя в отдельных случаях они могут быть обнаружены и таким спо­собом. Однако соответствующие изменения, коррелирующие с состоянием плазматической мембраны, всегда удается установить при изучении ультратонкой структуры клетки с помощью электронной микроскопии.

Более грубые нарушения ультраструктуры (появление разрывов плазматической мембраны, набухание наружной мембраны мито­хондрий и пр.) сопровождаются, как правило, прокрашиванием клетки трипановым синим и могут быть выявлены с помощью све­товой микроскопии. Прокрашенные клетки теряют почти все мета­болические функции.

Таким образом, характеристика тонкой ультраструктуры клетки дает достаточно точную информацию о корреляции между морфо­логией и функциональным ее состоянием, а также о ее интактно­сти. Однако использование электронного микроскопа для получе­ния этих характеристик представляет собой довольно трудоемкий и длительный процесс, который к тому же не дает возможности при­менить статистику. Поэтому, не отрицая необходимости периодиче­ского цитоморфологического контроля за получаемыми изолирован­ными гепатоцитами, следует, видимо, признать, что он не может быть использован как рутинный метод для наблюдения за быстрыми изменениями в клетках в процессе эксперимента и для оценки при этом их жизнеспособности.

Следует отметить также, что метаболические нарушения могут иметь место и в тех случаях, когда они не выявляются с помощью электронной микроскопии.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!

Пользовательский поиск

Узнайте больше:

Метаболические параметры оценки жизнеспособности изолированных гепатоцитов


Роль восстановленного глутатиона при индукции ПОЛ в гепатоцитах


Функционально-метаболические свойства изолированных гепатоцитов


Дыхание как показатель функционального состояния изолированных гепатоцитов


Дыхание изолированных гепатоцитов, сопряженное с активностью митохондриальной дыхательной цепи


Биотрансформация этанола в изолированных гепатоцитах


Инкубирование изолированных гепатоцитов


Транспорт кальция через плазматическую мембрану


Изолированные гепатоциты как биологическая модель для изучения печени


Оценка состояния плазматической мембраны гепатоцитов


Всё на тему гепатоциты, метаболизм



Большинство диет для похудения просто крадут ваши деньги

Логин:

Пароль:



Забыли свой пароль?
Регистрация
войти / регистрация

Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".