Пользовательский поиск

Анатомические и морфологические особенности изолированных гепатоцитов

При выделении гепатоцитов экспериментатор преследует две основные цели:

Продолжение ниже

Глюкозамин - биохимия и влияние на здоровье

... пациенты часто начинают превышать рекомендуемые дозировки. Предварительно показано, что в таких дозировках глюкозамин может повреждать клетки печени и повышать риск развития диабета. Побочные эффекты, которые обычно незначительны и редки, включают расстройство желудка, запор , ...

Читать дальше...

всё на эту тему


  1. получить максимально большой их выход относительно исходного количества ткани;

  2. сохранить их морфологическую и функциональную интактности.

Именно эти два момента характеризуют эффективность любого способа диспергирования ткани.

Максимальная эффективность методов ограничена морфологическими особенностями самой печени.

У взрослых животных печень составляет, как правило, 2-4% от веса тела. У животных, растущих в течение всей жизни (рыбы, крысы), вес печени также перманентно увеличивается, так что сохраняется определенная пропорциональность (с тенденцией к уменьшению) относительного веса печени у старых животных. У животных, вес которых достигает к определенному возрасту мак­симального, вес печени с этого момента остается неизменным и составляет, например, у крысы около 4% от веса ее тела.

Индекс митотической активности клеток печени взрослых жи­вотных близок к нулю. У крыс, по данным разных авторов, он ра­вен 0-0,4%. Это означает, что в нормальных физиологи­ческих условиях после дифференцировки клетки печени живут столько же, сколько и организм хозяина. Иначе говоря, возраст жи­вотного не влияет на число клеток печени. Однако, так как вес пе­чени при этом возрастает, должны увеличиваться размеры клетки. Видимо, этим объясняются существенные различия в значениях объема клеток, полученных разными авторами.

Клетки печени организованы в лобулы, которые имеют в центре эфферентные венулы, а на периферии — портальные триады, состоя­щие из венул, артериол и желчных протоков. Все они тесно приле­гают друг к другу. Паренхиматозные клетки расположены так, что они контактируют с тремя различными компартментами: околосинусоидальным пространством (37% поверхности клетки), желчными протоками (13% поверхности клетки) и соседними гепатоцитами (50% поверхности клетки). В соответствии с такой адатомией имеются два основных типа клеток: гепатоциты, или па­ренхиматозные клетки, и синусоидальные клетки. Гепатоциты составляют 90% от общего объема клеток, но только 65% от общего их числа. Это связано с тем, что паренхиматоз­ные клетки значительно крупнее остальных. Их диаметр равен 25 мкм. Поэтому в весовом отношении они составляют до 10% от общей популяции клеток, что позволяет рассматривать по­следнюю практически как гомогенную и связывать особенности ее кетаболизма главным образом с паренхиматозными клетками. В последние годы, однако, стало ясно, что паренхиматозные клетки не образуют однородную популяцию, но имеют морфологию и ферментный состав, зависящий от их положения в лобулах. Например, околопортальные клетки меньше и имеют большее отношение ядро/цитоплазма, чем центролобулярные. Они богаче лизосомами, митохондриями и связанными энзимами. Центролобулярные клетки содержат больше гликолитических энзимов и ферментов окисления жирных кислот.

Второй тип клеток — это ретикулоэндотелиальные или купферовские клетки (макрофаги печени) и эндотелиальные клетки. Купферовские клетки широко используются в настоящее время для исследования процесса фагоцитоза в ткани, и их выде­ление представляет самостоятельную задачу.

После диспергирования печени получают первичную суспензию, которая представляет собой смесь паренхиматозных и непаренхиматозных клеток, что при современных способах выделения состав­ляет 80-90% массы органа. Остальное — это соединительная и сосудистая ткань, которая удаляется. Дифференциальный подсчет клеток проводят, как правило, ру­нным методом по окрашиванию трипановым синим.

По данным большинства работ удается получать первичную суспензию, в которой от 90 до 98% клеток не окрашены трипановым синим. Однако выход клеток и их интактность существенно зависят от способа их выделения. Механические и химические способы диспергирования ткани позволяли получать в отдельных случаях сравни­тельно большое количество клеток, но все они имели разрушенные мембраны и полностью прокрашивались трипановым синим. Замечено также, что при использовании энзиматических способов диспергирования ткани только коллагеназа обеспечивает максимально большой выход клеток и высокий процент их непрокрашиваемости (более 90%). Перфузионный метод с применением коллагеназы дает существенно больший выход клеток, чем неперфузионный, но количество поврежденных гепатоцитов (по окраске трипановым синим) в обоих случаях примерно одинаково. И хотя гиалуронидаза не используется в настоящее время большинством исследователей, ее присутствие в растворе с коллагеназой увеличивает выход клеток на 60%.

Как уже говорилось, степень дисперсии ткани и получаемое количество клеток зависят от активности фермента, качества и продолжительности перфузии и других деталей процедуры выделения. Наряду с этим существенное значение имеют индивидуальные различия между животными, диета, время года и пр. Так, например, выход клеток из печени мелких животных меньше, чем из печени крупных, и у молодых на 20-30% меньше, чем у старых.

Гепатоциты в первичной суспензии имеют скорее неправильную форму, что отражает, по-видимому, их истинную геометрию. Так как значительная часть гепатоцитов — это диплоидные, и даже полиплоидные клетки, они имеют глубокую разделительную борозду на поверхности, заметную в световом микроскопе, которая может осложнять счет клеток. В процессе инкубации гепатоциты становятся выпуклокруглыми.

В результате очистки суспензии происходит отделение парехиматозных клеток от других типов клеток, клеточных агрегатов, кусочков соединительной ткани и сосудов, а также субклеточных осколков. Конечная суспензия клеток используется для эксперимента. Масса оставшихся в ней клеток соответствует примерно 30-40% от начального сырого веса ткани. Непаренхиматозные клетки составляют всего 1-2%. Паренхиматозные клетки не должны на 90-95% окрашиваться трипановым синим.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".