Пользовательский поиск

Анализ крови на ВИЧ

Анализ крови на ВИЧ используется для обнаружения в сыворотке крови, слюне или моче вируса иммунодефицита человека (ВИЧ), вызывающего синдром приобретенного иммунодефицита (СПИД). Подобный анализ может определить наличие антител к ВИЧ, антигенов или РНК.

Продолжение ниже

Где и как сдать анализ на ВИЧ/СПИД - ответы на частые вопросы

Единственным способом узнать, есть ли у вас ВИЧ, является анализ на ВИЧ (обычно анализ на антитела к ВИЧ). Вы не можете сказать, если ... ... антитела к ВИЧ. Анализ на антитела к ВИЧ выявляет антитела к вирусу в крови человека. Для большинства выработка этих антител занимает от 6 ...

Читать дальше...

всё на эту тему


Содержание статьи:

  1. Терминология
  2. Принципы тестирования на ВИЧ
    1. Анализ донорской крови и клеточных продуктов
    2. Диагностика ВИЧ-инфекции
    3. Права человека при тестировании
    4. Конфиденциальность тестирования на ВИЧ
    5. Анонимное тестирование
    6. Рекомендации по регулярному проведению анализа крови на ВИЧ
  3. Анализ на наличие антител к ВИЧ
    1. Инкубационный период
    2. Связанный иммуносорбентный метод тестирования (ELISA)
    3. Иммуноблоттинг
    4. Экспресс-анализ на ВИЧ или исследование по месту лечения
    5. Интерпретация результатов анализа антител к ВИЧ
    6. Точность анализа крови на ВИЧ
  4. Тестирование на определение антигенов
  5. Тестирование нуклеиновых кислот (NAT)
  6. Скрининг
  7. Другие методы анализа, используемые при лечении ВИЧ
  8. Критика
    1. Пероральные тесты
    2. Отрицание СПИДа
  9. Подделка тестов на ВИЧ

Терминология

Инкубационный период ВИЧ – это период между появлением инфекции и моментом, когда анализ крови на ВИЧ может идентифицировать какие-либо изменения. Средний инкубационный период для анализа на наличие антител к ВИЧ-1 составляет 25 дней для подтипа В. Для анализа на определение антигенов этот период сокращается примерно до 16 дней, а в случае тестирования нуклеиновых кислот – до 12 дней.

Медицинский анализ часто характеризуется терминами

  • Чувствительность теста: Процент положительных результатов в случае наличия ВИЧ.
  • Точность теста: Процент отрицательных результатов в случае отсутствия ВИЧ.

Все диагностические тесты имеют свои ограничения и иногда дают ошибочные или спорные результаты.

  • Ложноположительный результат: Положительный результат анализа у здорового пациента.
  • Ложноотрицательный результат: Отрицательный результат анализа у инфицированного пациента.

Ложноположительный результат анализа может быть вызван неспецифическими реакциями, гипергаммаглобулинемией или присутствием антител к другим инфекционным агентам, антигенно идентичным ВИЧ. Аутоиммунные заболевания, такие, как системная эритематозная волчанка, также изредка дают при тестировании ложноположительные результаты. Большинство ложноотрицательных результатов анализа получаются в течение инкубационного периода.

Принципы тестирования на ВИЧ

Анализ донорской крови и клеточных продуктов

Метод анализа, выбранный для тестирования донорской крови и тканей, должен обеспечивать высокую степень точности обнаружения ВИЧ при его наличии (то есть требуется высокая чувствительность теста). На западе в банках крови используется комбинация анализа на наличие антител к ВИЧ, антигенов и тестирования нуклеиновых кислот. По оценкам Всемирной Организации Здравоохранения, на 2000 г. применение неэффективных методов скрининга крови привело к увеличению числа ВИЧ-инфицированных на 1 миллион человек по всему миру.

В США с 1985 г. вся донорская кровь тестируется на ВИЧ-1 и ВИЧ-2 связанным иммуносорбентным методом, а также тестированием нуклеиновых кислот. Помимо этого производится тщательный отбор доноров. На 2001 г. риск ВИЧ-инфицирования в результате переливания крови в США составлял примерно один случай инфицирования из 2,5 миллионов операций переливания.

Диагностика ВИЧ-инфекции

Методы тестирования на ВИЧ должны обладать высокой чувствительностью и точностью. В США это достигается использованием алгоритма, совмещающего два метода анализа крови на ВИЧ. При обнаружении антител первоначальным анализом на основе связанного иммунносорбентного метода второй анализ, использующий процедуру иммуноблоттинга, определяет размер антигенов в наборе для анализа, связанном с антителами. Комбинация этих двух методов обеспечивает высокую точность тестирования (см. ниже).

Права человека при тестировании

Политика Объединённой программы ООН по ВИЧ/СПИДу и ВОЗ предписывает проведение анализа крови на ВИЧ с соблюдением прав человека и этических принципов. В соответствии с этими принципами проведение анализа крови на ВИЧ должно

  • Быть конфиденциальным;
  • Сопровождаться консультационной помощью (для пациентов с положительным результатом тестирования);
  • Проводиться с информированного согласия пациента.

Конфиденциальность при тестировании на ВИЧ

Существует определенное противоречие в этической обязанности медицинских работников информировать сексуальных партнеров пациентов, инфицированных ВИЧ, о существующем риске заражения. Некоторые законодательные системы разрешают производить подобное разглашение информации, другие – нет. Большинство медицинских учреждений с государственным финансированием в настоящее время проводят политику конфиденциальности тестирования. Это позволяет легко осуществлять мониторинг ВИЧ-инфицированных пациентов, в отличие от анонимного тестирования, при котором о пациенте известен только присвоенный ему номер. В вопросе сохранения секретности проведения анализа присутствует противоречивость.

В развивающихся странах вопрос конфиденциальности тестирования решается применением домашнего анализа и консультирования относительно ВИЧ. Это позволяет индивидам, парам и семьям узнать о наличии/отсутствии у них ВИЧ-инфекции в комфортной и безопасной домашней обстановке. Чаще всего используется экспресс-анализ, дающий результат через 15-30 минут. Кроме того, в случае положительного результата тестирования медицинский работник сразу может предложить консультацию относительно лечения ВИЧ, ухода и мер безопасности пациента.

Анонимное тестирование

При этом тестировании на ВИЧ исследуемым образцам присваивается только номер, имя инфицированных пациентов не указывается. Медицинские центры сообщают о возможности такого анализа.

Рекомендации по регулярному проведению анализа крови на ВИЧ

В США входит в силу регулярное тестирование на ВИЧ всех пациентов во всех медицинских учреждениях. В 2006 г. Центр по контролю заболеваемости США выступил с инициативой регулярного добровольного тестирования на ВИЧ всех граждан страны в возрасте 13-64 лет, обращающихся за медицинской помощью. Согласно статистике, 25% ВИЧ-инфицированных граждан не знали о наличии у них инфекции; данная инициатива в случае успеха должна была сократить уровень новых заболеваний на 30% в год. Центр по контролю заболеваемости призывает к повсеместному распространению регулярного тестирования, для чего предлагает смягчить требования по получению письменного согласия на тестирование и не проводить столь интенсивного предварительного консультирования.

Анализ на наличие антител к ВИЧ

Методы анализа на наличие антител к ВИЧ разработаны специально для регулярного тестирования на ВИЧ взрослых пациентов; эти тесты отличаются низкими затратами и высокой точностью.

Инкубационный период

Анализ на наличие антител к ВИЧ может дать ложноотрицательный результат (отсутствие антител при наличии ВИЧ) во время инкубационного периода, промежутка времени от трех недель до шести месяцев между ВИЧ-инфицированием и выработкой измеряемого количества антител к ВИЧ. У большинства людей идентифицируемые антитела к ВИЧ начинают вырабатываться примерно через 30 дней после заражения, в то время как у других сероконверсия происходит позже. У абсолютного большинства людей (97%) через три месяца после инфицирования присутствуют идентифицируемые антитела к ВИЧ; шестимесячный инкубационный период встречается очень редко при применении современных методов анализа. Во время инкубационного периода ВИЧ-инфицированный человек может заражать других людей, хотя у них анализ может не выявить наличия инфекции. Антиретровирусная терапия, проводимая в течение инкубационного периода ВИЧ может отсрочить выработку антител и продлить инкубационный период до 12 месяцев. Это не касается пациентов, проходящих лечение с постконтактной профилактикой (ПКП). Такие пациенты должны проходить тестирование связанным иммуносорбентным методом с различными интервалами времени после 28-дневного курса лечения, иногда и по завершении 6-месячного инкубационного периода. Анализ наличия антител к ВИЧ может дать ложноотрицательный результат и у пациентов, страдающих агаммаглобулинемией, сцепленной с Х-хромосомой; для таких пациентов должны применяться другие методы тестирования.

Известно три вида случаев задержки сероконверсии к ВИЧ среди медицинских работников; в этих случаев анализ медицинских работников на наличие антител к ВИЧ давал отрицательный результат по истечении 6 месяцев после контакта, но в течение 12 месяцев после контакта они давали сероположительную реакцию. Определение последовательности ДНК подтвердило источник ВИЧ-инфицирования в одном из случаев. Два случая задержки сероконверсии были связаны с одновременным контактом с вирусом гепатита С (ВГС). В одном из случаев коинфицирование было связано с быстрым курсом течения гепатита С; в то же время, неизвестно, влияет ли ВГС непосредственно на риск заражения или курс развития ВИЧ-инфекции или является маркером других факторов, связанных с контактом.

Связанный иммуносорбентный метод тестирования (ELISA)

Связанный иммуносорбентный метод тестирования на ВИЧ (ELISA) или иммуноферментный анализ (ИФА) был первым методом, повсеместно применявшимся для диагностики ВИЧ. Этот тест обладает высокой чувствительностью.

В процессе этого метода анализа сыворотка крови человека растворяется в 400-кратном размере и помещается на планшет, на котором находятся антигены ВИЧ. Если в сыворотке присутствуют антитела к ВИЧ, они связываются с данными антигенами ВИЧ. Затем планшет промывается для удаления всех остальных компонентов сыворотки. После этого на планшет помещаются специально подготовленное “вторичное антитело” – антитело, связывающееся с антителами человека, после чего планшет снова промывается. Это вторичное антитело предварительно химически связывается с ферментом. Таким образом, на планшете содержится фермент в пропорции со вторичным антителом. Добавляется субстрат для фермента, и катализ фермента вызывает изменение цвета или появление свечения. Результат анализа связанным иммуносорбентным методом представляется в числовом выражении; наиболее противоречивым аспектом данного метода является определение границы между положительным и отрицательным результатами.

Иммуноблоттинг

Так же, как и связанный иммуносорбентный метод исследования, иммуноблоттинг является методом анализа на наличие антител к ВИЧ. Но в отличие от связанного иммуносорбентного метода, в этом случае сначала вирусные белки отделяются и иммобилизуются. На последующих стадиях связывание антител сыворотки с определенными белками ВИЧ может быть визуализированно.

Если описывать процедуру более детально, то клетки, которые могут быть ВИЧ-инфицированными, открываются, и их белки помещаются в гель, через который пропускается электрический ток. Разные белки движутся с разной скоростью в этом поле, в зависимости от их размера, а их электрический заряд выравнивается сурфактантом - лаурил сульфатом натрия. Некоторые готовые наборы для иммуноблоттинга уже содержат белки ВИЧ на полоске из ацетата целлюлозы. Как только белки должным образом отделены, они перемещаются к мембране, и повторяется процедура, аналогичная связанному иммуносорбентному методу тестирования: раствор сыворотки крови человека помещается на мембрану, и антитела сыворотки связываются или не связываются с некоторыми белками ВИЧ. Антитела, которые не связываются с белками, вымываются, а антитела, меченные ферментом, способные связываться с антителами человека, определяют, к каким белкам ВИЧ человек имеет антитела.

Не существует универсального критерия для интерпретации результатов иммуноблоттинга: количество вирусных полос, которые должны присутствовать, может варьироваться. Если не обнаруживается никаких вирусных полос, результат отрицательный. Если обнаружена хотя бы одна вирусная полоса для каждой из групп генных продуктов ГАГ, POL и гена белка оболочки вируса, результат положительный. Подход к интерпретации результатов, основанный на рассмотрении трех генных продуктов, не нашел применения в клинической практике. В случае обнаружения меньше необходимого числа вирусных полос, результат анализа признается сомнительным, и пациент должен быть протестирован повторно для получения более определенного результата. Почти все пациенты с сомнительным результатом иммуноблоттинга, обследуемые повторно через месяц, получают положительный результат анализа; если же у пациента, обследуемого в течение шести месяцев, сохраняется сомнительный результат, это может свидетельствовать об отсутствии ВИЧ-инфекции. Среди здорового населения группы низкого риска сомнительный результат иммуноблоттинга наблюдается примерно у 1 из 5 000 пациентов. В то же время у лиц, имеющих высокий риск контакта с носителями ВИЧ-2, например, в западной Африке, сомнительный результат иммуноблоттинга может свидетельствовать об инфицировании ВИЧ-2.

Белки ВИЧ, используемые для иммуноблоттинга, производятся с помощью рекомбинантной ДНК по технологии рекомбинантного иммуноблоттинга (RIBA).

Экспресс-анализ на ВИЧ или исследование по месту лечения

Экспресс-анализ на наличие антител к ВИЧ представляет собой качественный иммунологический анализ, используемый в исследовании по месту лечения для диагностики ВИЧ-инфекции. При проведении этого анализа следует принимать во внимание клиническое состояние, анамнез и факторы риска обследуемого пациента. Прогностичность положительного результата экспресс-анализа на наличие антител к ВИЧ среди населения группы низкого риска не была оценена. Методы экспресс-анализа на ВИЧ должны использоваться в соответствующем порядке, предполагающем множественное тестирование и разработанном с целью статистического обоснования результатов экспресс-анализа крови на ВИЧ.

Отсутствие антител к ВИЧ не означает отсутствие ВИЧ-инфекции. Иногда проходит несколько месяцев после заражения, прежде чем количество антител достигнет определяемого уровня, и в течение этого периода экспресс-анализ на наличие антител к ВИЧ не отражает истинного инфекционного статуса. У большинства людей количество антител достигает определяемого уровня в период от двух до шести недель.

Несмотря на высокую точность этих методов анализа, ложные результаты все же имеют место. Положительный результат должен быть подтвержден лабораторным иммуноблоттингом.

“Домашний экспресс-анализ на ВИЧ-1” (Home Access Express HIV-1 Test) – единственный домашний тест на ВИЧ, одобренный Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США: пациент берет небольшое количество крови из пальца и отправляет его почтой в лабораторию; результат и консультация предоставляются по телефону. Все результаты анонимны и проходят проверку перед сообщением их пациенту.

OraQuick– анализ на наличие антител к ВИЧ, дающий результаты через 20 минут. Кровь, плазма или слюна смешиваются в пробирке с проявляющим раствором, результат определяется с помощью тест-полоски. Обычно позволяет обнаружить ВИЧ-1 и ВИЧ-2.

Orasure– анализ на ВИЧ, использующий частицы жидкости из тканей щеки или десны. Это анализ на наличие антител к ВИЧ, использующий, прежде всего, связанный иммуносорбентный метод, а затем иммуноблоттинг.

Uni-Gold– экспресс-анализ на наличие антител к ВИЧ, дающий результат через 10-12 минут. Небольшое количество крови помещается в проявляющий раствор. Единственный метод анализа крови на ВИЧ -1,одобренный Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США.

Clearview Complete HIV 1/2 и Clearview HIV 1/2 Stat-Pak– методы экспресс-анализа на наличие антител к ВИЧ-1 и ВИЧ-2 в крови, сыворотке или плазме. Результат определяется в течение 15 минут.

Используется также анализ мочи; он применяет технологии как связанного иммуносорбентного метода тестирования, так и иммуноблоттинга.

iDiagnostics Rapid HIV Test является, согласно официальному Интернет-сайту, домашним методом тестирования на ВИЧ, не получившим одобрения Управления по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США. Компания предлагает наборы для анализа крови или мочи, произведенные корпорацией InTec PRODUCTS. Так же, как в домашнем тесте на беременность, пациент берет небольшое количество крови/мочи и помещает его в кассету. Результат визуализируется через 15 минут. Точность этого метода тестирования не подтверждена Управлением по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США, и он не разрешен для распространения в США.

Экспресс-анализ на наличие антител к ВИЧ INSTI HIV-1/HIV-2* - качественный лабораторный экспресс-тест наличия антител к ВИЧ типа 1 в крови, сыворотке или плазме человека. Метод разработан для использования квалифицированными работниками в медицинских учреждениях, клинических лабораториях, в условиях неотложной помощи, а также в частных врачебных кабинетах как метод скринингового обследования, предоставляющий результат менее чем через 60 секунд. Набор для анализа включает в себя мембранную установку INSTI, растворитель для образца, цветной проявитель и осветляющий раствор и предоставляется в упаковке для использования по месту лечения или для лабораторного использования.

Reveal HIV- качественный лабораторный экспресс-тест наличия антител к ВИЧ в крови, сыворотке или плазме. Это один из самых быстрых доступных методов анализа, определяющий ранние признаки инфицирования лучше некоторых других экспресс-тестов. Reveal HIV одобрен в Канаде, США, Европе, Африке, Азии и Южной Америке.

Интерпретация результатов анализа на наличие антител к ВИЧ

Для диагностики нельзя использовать только связанный иммуносорбентный метод тестирования, даже если он показывает высокую вероятность наличия антител к ВИЧ-1. в США подобный результат не признается “положительным” до подтверждения его иммуноблоттингом.

Связанный иммуносорбентный метод тестирования был разработан для анализа донорской крови на ОТСУТСТВИЕ ВИЧ-инфекции. Поэтому нельзя сделать заключение, что кровь, не допущенная к переливанию из-за положительного результата анализа связанным иммуносорбентным методом, действительно содержит ВИЧ-инфекцию. Иногда при повторном обследовании донора спустя несколько месяцев связанный иммуносорбентный метод тестирования дает отрицательный результат. Поэтому прежде чем признать результат обследования на ВИЧ “положительным” проводится подтверждающий иммуноблоттинг.

Редкие ложноположительные результаты тестирования вследствие действия факторов, не связанных с контактом с носителем ВИЧ, более характерны для связанного иммуносорбентного метода, чем для иммуноблоттинга. Ложноположительные результаты тестирования могут быть вызваны медицинскими причинами, такими, как недавно перенесенные острые заболевания и аллергия. Всплеск ложноположительных результатов, наблюдавшийся осенью 1991 г. был сначала отнесен к применению в том эпидемическом сезоне вакцин против гриппа, но дальнейшее исследование обнаружило перекрёстную реактивность на некоторые неспецифические тесты. Ложноположительный результат тестирования не является показателем состояния высокого риска для здоровья. При комбинировании связанного иммуносорбентного метода тестирования с иммуноблоттингом уровень ложноположительных результатов очень низок, а точность высока (см. выше).

Методы анализа на наличие антител обладают высокой чувствительностью, то есть реакцией на антитела к ВИЧ, но не всегда положительный или сомнительный результат тестирования связанным иммуносорбентным методом означает, что человек инфицирован ВИЧ. Результат интерпретируется с учетом факторов риска и клинического обследования, а также необходимо провести подтверждающий анализ методом иммуноблоттинга. Пациент с сомнительным результатом тестирования должен быть позже обследован повторно.

Точность анализа крови на ВИЧ

Современные методы анализа крови на ВИЧ обладают высокой точностью. В июле 2005 г. было опубликовано исследование Американской рабочей группы по профилактическим мероприятиям относительно рисков и преимуществ скрининга ВИЧ. Авторы пришли к следующему заключению:

…использование постоянно реагирующего иммуноферментного анализа с последующим контрольным иммуноблоттингом или иммунофлюоресцентным анализом остается стандартным методом тестирования на ВИЧ-1. Широкое исследование 752 американских лабораторий показало чувствительность иммуноферментного анализа на уровне 99,7% и уровень точности в размере 98,5%, а исследование доноров крови в США дало показатели точности на уровне 99,8% и более 99,99%. С использованием контрольного иммуноблоттинга шанс получения ложноположительного результата среди населения с низкой распространенностью инфекции составляет около 1 из 250000 (доверительный интервал 95%, от 1 из 173000 до 1 из 379000).

Приводимый здесь уровень точности недорогих скрининговых тестов на основе иммуноферментного анализа показывает, что из 1 000 результатов здоровых пациентов около 15 будут ложноположительными. Подтверждение результатов анализа (т. е. повторное, по возможности, обследование) может сократить вероятность ложноположительного результата до 1 случая из 250 000. Показатель уровня чувствительности говорит о том, что из 1 000 результатов инфицированных пациентов 3 будут ложноотрицательными (аномалия McGovern-Tirgari). Тем не менее, учитывая долю ВИЧ-инфицированного населения на территории большинства медицинских центров в США, прогностичность отрицательного результата этих методов анализа исключительно высока, то есть отрицательный результат тестирования окажется правильным более чем в 9 997 случаях из 10 000 (99,97% случаев). Благодаря высокой прогностичности отрицательного результата этих методов анализа Центр по контролю заболеваемости в США рекомендует считать отрицательный результат тестирования окончательным свидетельством того, что у пациента отсутствует ВИЧ.

Конечно, фактическая статистика зависит от характера обследуемого населения. Результаты любого медицинского обследования (учитывая, что ни один метод анализа не обладает 100%-ной точностью) зависят от предварительной вероятности того, что пациент болен или здоров. Обычно предварительная вероятность оценивается на основе данных о заболеваемости определенной группы населения или на определенной территории. Прогностичность положительного или отрицательного результата всех методов анализа, в том числе методов тестирования на ВИЧ, учитывает предварительную вероятность заболевания и точность метода обследования для определения новой степени вероятности того, что пациент болен или здоров (также называемой апостериорной вероятностью). Вероятность корректности положительного результата возрастает при распространении или повышении уровня ВИЧ-инфицированных среди населения. В свою очередь, при распространении инфекции прогностичность отрицательного результата снижается. Таким образом, среди населения группы высокого риска, например, гомосексуалистов, часто вступающий в незащищенный сексуальный контакт с незнакомыми партнерами, корректность положительных результатов тестирования будет иметь большую вероятность, чем среди населения низкой группы риска, например, добровольных доноров крови.

Точность методов тестирования на ВИЧ, используемых в настоящее время в США, была подтверждена многими исследованиями, при этом доля ложноположительных результатов оценивается в размере 0,0004-0,0007, а доля ложноотрицательных результатов – в размере 0,0003 среди всего населения.

Тестирование на определение антигенов

Тестирование на определение антигенов p24 определяет наличие белка ВИЧ p24 (также называемого CA), корового белка вируса. Кровь человека смешивается с моноклональными антителами, специфичными для белка p24. Белок p24, содержащийся в крови человека, связывается с моноклониальным антителом, а антителак моноклональным антителам к p24, меченные ферментом, вызывают изменение цвета, если p24 присутствует в пробе крови.

Данный метод анализа в настоящее время не используется на регулярной основе в США и ЕС для скрининга донорской крови из соображений снижения риска ложноотрицательных результатов в течение инкубационного периода. Более эффективным является метод тестирования нуклеиновых кислот. Тестирование на определение антигенов p24 не используется в общей диагностике, так как обладает низкой чувствительностью и эффективно только в течение определенного периода времени после инфицирования, прежде чем организм человека начнет вырабатывать антитела к белку p24.

Тестирование нуклеиновых кислот (NAT)

Методы тестирования нуклеиновых кислот (NAT) амплифицируют и определяют одну или более из нескольких целевых последовательностей, расположенных в определенных генах ВИЧ, как, например, ГАГ ВИЧ-I, ГАГ ВИЧ-II, ген белка оболочки ВИЧ или ВИЧ-pol. Так как эти методы анализа являются относительно дорогими, в них обследуются одновременно 8-24 проб крови; если обследование дает положительный результат, каждая проба проходит повторно отдельное тестирование. Слабая концентрация вируса в пробах крови, хотя и значительно снижает стоимость метода, также уменьшает его чувствительность, увеличивая инкубационный период на 4 дня (с учетом 20-кратного раствора, время удвоения вируса ~20 ч., предел обнаружения 50 ед./мл, предел обнаружения достигает 1000 ед./мл). С 2001 г. в США донорская кровь тестируется методом тестирования нуклеиновых кислот, сокращая инкубационный период до среднего значения 17 дней (доверительный интервал 95%, 13-28 дней, с учетом депонирования проб крови). Для работы с пациентами, инфицированными ВИЧ-1, используется один из вариантов этого метода анализа в сочетании с учетом клинической картины и других лабораторных признаков развития болезни.

При тестировании методом ОТ-ПЦР вирусная РНК извлекается из плазмы пациента и подвергается обратной транскрипции (ОТ) для конвертации РНК в кДНК. Затем проводится полимеразно-цепная реакция (ПЦР) с использованием двух праймеров, уникальных для генома вируса. После завершения ПЦР – амплификации полученные продукты ДНК скрещиваются с определенными олигонуклеотидами, расположенными на стенке сосуда, и при связывании пробы крови с ферментом становятся видимыми. Содержание вируса в пробе может быть определено количественно с достаточной точностью для обнаружения трехкратных изменений.

При использовании метода тестирования Quantiplex bDNA или разветвлённой ДНК-гибридизации плазма помещается в центрифугу для концентрации вируса, а затем открывается для высвобождения РНК. Добавляются олигонуклеотиды, связывающиеся с вирусной РНК и с определенными олигонуклеотидами, располагаемыми на стенке сосуда. В этом случае вирусная РНК перемещается к стенке сосуда. Затем добавляются новые олигонуклеотиды, которые связываются с некоторыми участками РНК, и другие олигонуклеотиды, которые связываются с некоторыми участками этих нуклеотидов. Это производится с целью амплификации сигнала. Наконец, добавляются олигонуклеотиды, которые связываются с последней группой олигонуклеотидов и с ферментом; действие фермента вызывает цветовую реакцию, позволяющую определить количественно содержание вирусной РНК в пробе крови. У пациентов с концентрацией вируса в крови более 25 000 ед. на миллилитр проводится исследование влияния антиретровирусной терапии с помощью периодического измерения содержания РНК ВИЧ-1 в плазме совместно с данным анализом.

Скрининг

Правительство ЮАР объявило о планируемом в марте 2011 г. начале тестирования на ВИЧ учащихся средних школ. Эта программа была отменена из соображений нарушения права учащихся на частную жизнь, а также из тех соображений, что в школах обычно нет возможности хранения подобной информации и оказания консультационной помощи инфицированным подросткам. В Южной Африке любой подросток старше 12 лет может пройти тестирование на ВИЧ без ведома или согласия родителей. Прежде чем данная программа была завершена, в её рамках было протестировано около 80 000 учащихся школ в трех областях.

Другие методы анализа, используемые при лечении ВИЧ

Анализ содержания Т-лимфоцитов CD4 (CD4 T-cellcount) не является обследованием на ВИЧ, а, скорее, процедурой для определения количества Т-лимфоцитов в крови.

Анализ CD4 не определяет наличия ВИЧ. Этот тест используется для наблюдения за функциями иммунной системы зараженных пациентов. Снижение содержания Т-лимфоцитов говорит о прогрессировании болезни. Нормальное содержание Т-лимфоцитов варьируется в промежутке от 500 клеток/мм3 до 1000 клеток/мм3. При снижении этого уровня до 200 клеток/мм3 или при появлении оппортунистических инфекций у больных диагностируется СПИД. Метод анализа CD4 используется для диагностики СПИДа с 1992 г.; значение 200 клеток/мм3 было установлено в качестве критерия потому, что соответствует значительному повышению риска оппортунистических инфекций. Понижение результатов анализа CD4 говорит о необходимости проведения профилактики определенных типов оппортунистических инфекций.

Низкое содержание Т-лимфоцитов, определенное методом тестирования CD4, может быть связано с различными факторами, в том числе вирусными инфекциями, бактериальными инфекциями, паразитическими инфекциями, заражением крови, туберкулезом, кокцидиоидозом, ожогами, травмами, внутривенным введением чужеродных белков, неполноценным питанием, избыточными физическими нагрузками, беременностью, нормальными суточными колебаниями, психологическим стрессом и социальной изоляцией.

Данный метод анализа иногда используется для тестирования иммунной системы пациентов, содержание Т-лимфоцитов CD4 в крови которых уменьшено вследствие факторов, иных, чем ВИЧ-инфицирование, в том числе некоторых заболеваний крови, генетических нарушений и побочных эффектов многих химиотерапевтических средств лечения.

В общем случае, чем ниже содержание в крови Т-лимфоцитов, тем более ослаблены функции иммунной системы. Нормальный показатель теста CD4 составляет от 500 до 1500 Т-лимфоцитов CD4+ на микролитр, и у здоровых людей этот показатель может варьироваться в зависимости от наличия недавно перенесенных заболеваний, режима питания, уровня физической нагрузки и других факторов. У женщин этот показатель обычно несколько ниже, чем у мужчин.

Критика

Пероральные тесты

В результате возросшего числа ложноположительных результатов перорального экспресс-тестирования на ВИЧ в 2005 г. Министерство здравоохранения Нью-Йорка разработало дополнительную возможность анализа крови, взятой из пальца после получения любого результата и перед использованием иммуноблоттинга для подтверждения положительной реакции. По причине дальнейшего увеличения числа ложноположительных результатов тестирования в конце 2007 г. и начале 2008 г. в клиниках заболеваний, передаваемых половым путём Министерства здравоохранения Нью-Йорка, эти клиники приняли решение отказаться от перорального анализа и возобновить вместо этого анализ на ВИЧ цельной крови, взятой из пальца. Несмотря на увеличение ложноположительных результатов тестирования в клиниках Министерства здравоохранения Нью-Йорка, Управление по контролю за качеством пищевых продуктов и лекарственных препаратов США по-прежнему поддерживает проведение анализа слюнной жидкости без укола в силу его популярности в поликлиниках и удобства в использовании. Глава медицинской программы по контролю ВИЧ в округе Кинг штата Сиэтл заявил, что метод тестирования OraQuick оказался неспособным определить по меньшей мере 8 процентов из 133 пациентов, признанных инфицированными в ходе аналогичного диагностического тестирования. Было проведено исследование качества и уровня ложноположительных результатов. Следует понимать, что положительный результат перорального анализа является предварительным и должен быть подтвержден контрольным анализом, независимо от типа исследуемой пробы (цельная венозная кровь, цельная кровь, взятая из пальца или слюнная жидкость). Некоторые медицинские учреждения, в которых не наблюдался всплеск ложноположительных результатов тестирования продолжают использовать метод анализа на наличие антител к ВИЧ OraSure's OraQuick.

Отрицание СПИДа

Обследование на ВИЧ критикуется людьми, отрицающими существование СПИДа (маргинальная группа людей, считающих, что ВИЧ либо не существует, либо не представляет опасности). Корректность серологического исследования подтверждается изоляцией и выращиванием ВИЧ, а также определением РНК ВИЧ методом ПЦР, широко признанными “золотым стандартом” в микробиологии. В то время как критики СПИДа фокусируются на отдельных компонентах тестирования на ВИЧ, комбинирование связанного иммуносорбентного метода тестирования и иммуноблоттинга в диагностике ВИЧ дает точные результаты с низким уровнем ложноположительных и ложноотрицательных результатов, как было указано выше. Взгляды критиков СПИДа основаны на выборочном анализе в большинстве случаев устаревших научных исследований; наукой повсеместно признано, что ВИЧ является причиной СПИДа.

Подделка тестов

В свое время по почте или через Интернет было разослано значительное количество поддельных тестов. В 1997 г. житель Калифорнии был обвинен в мошенничестве с использованием почты и телефона для рассылки якобы домашних наборов для тестирования. В 2004 г. Федеральная торговая комиссия США обратилась к почтовой службе “Федерал Экспресс” и американской таможенной службе с просьбой о конфискации домашних тестов на ВИЧ Discreet, произведенных Грегори Стивеном Вонгом в Ванкувере, провинции Британская Колумбия. В феврале 2005 г. Комиссией по контролю за лекарствами и питательными веществами было издано предупреждение против использования наборов для экспресс-анализа крови на ВИЧ и других наборов для домашнего тестирования, произведенных компанией Globus Media в Монреале, Канада.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


Мне нравится0
Василий
Кровь человека не перестаёт быть объектом постоянного исследования учёными всего мира. Например, в последнее время всё большую популярность приобретает анализ крови, позволяющий определить продолжительность жизни конкретного человека.
Имя Цитировать Мне нравится0
 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проекте Карта сайта β На здоровье! © 2008—2017 
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".