Пользовательский поиск

Иммуноферментный анализ

Этот метод позволяет в режиме пре­дельно высокой чувствительности определять белковые компонен­ты и низкомолекулярные соединения в сложных биохимических объектах.

Продолжение ниже

Иммунитет и средства для его повышения

... около 1000 года н.э. китайцы начали практиковать форму иммунизации путём сушки и вдыхания порошка, полученного из корок, поражённых оспой. Иммунитет - биологический термин, который описывает состояние с достаточной биологической защитой, чтобы избежать инфекций, заболеваний ...

Читать дальше...

всё на эту тему


Основой метода служит, с одной стороны, способность анти­тел образовывать прочные специфические комплексы с анализи­руемым соединением, с другой стороны — способность фермен­тов проводить определенные химические реакции. Измеряемым параметром является активность (концентрация) маркерного фер­мента. Фермент является химическим усилителем сигнала. В ре­зультате ферментативной реакции в течение определенного вре­мени с участием одного активного центра образуются 105—107 молекул продукта. Это позволяет увеличить чувствительность ана­лиза в 105-107 раз и в результате обнаруживать ультранизкие ко­личества веществ. Иммуноферментный анализ применяется при диагностике в медицине, ветеринарии, при мониторинге объек­тов окружающей среды и т.д.

Селективными агентами иммуноферментного анализа являют­ся антитела (иммуноглобулины). Антитела синтезируются в орга­низме высших животных в ответ на появление чужеродного веще­ства — антигена. Антитела имеют одинаковую организацию вто­ричной, третичной структуры и различаются структурой вариа­бельного участка Fab-фрагмента, ответственного за комплексообразование с антигеном. Под антигеном понимают некоторую обобщенную структуру, против которой могут быть получены ан­титела. В качестве антигенов могут выступать клетки микроорга­низмов, вирусы, белки и ряд низкомолекулярных агентов.

Антитела традиционно получают иммунизацией животных. Для этого в кровь животного вводят антиген в течение определенного времени, вызывая активацию лимфоцитов и синтез соответству­ющего иммуноглобулина. В результате получают набор белковых молекул, обладающих способностью связывать антиген. Это так называемые поликлональные антитела. Связывание характеризу­ется определенным диапазоном констант комплексообразования.

Для целей иммуноферментного анализа большое развитие по­лучили методы синтеза моноклональных антител, основанные на использовании гибридом. Гибридома — это гибрид иммуноглобулинпроизводящих клеток — В-лимфоцитов и опухолевых, рако­вых клеток, миеломных лимфоцитов (Г. Келер, К. Мильштейн, 1975 г.). В результате реакции гибридизации получаются антитело­продуцирующие клеток, гибридомы, способные размножаться в системе invitro. Гибридомная технология обеспечивает иммуноферментный анализ необходимым количеством антител, которые характеризуются узким распределением по константам комплексообразования с антигеном.

Физико-химической основой метода является исследование равновесия образования комплекса между антителом Ab и анти­геном Ag.

Если антитело «метится» ферментом за счет образования кова­лентной связи между двумя белками, то по уровню связанного или свободного меченого антитела или антигена можно опреде­лить концентрацию антигена (клеток микроорганизма, вируса, белка, низко молекулярного соединения).

Получение конъюгатов иммуноглобулина и фермента может быть осуществлено набором химических методов. Аналогичными способами получают конъ­югаты между антигеном и ферментной меткой.

В качестве метки для иммуноферментного анализа используют различные ферменты. Критерием выбора является высокая ката­литическая активность, стабильность, удобный метод мониторинга каталитической активности, высокий уровень сохранения актив­ности в реакции конъюгирования с антителом. Чувствительность иммуноферментного анализа определяется константой диссоциа­ции комплекса антиген—антитело и качеством реакции опреде­ления ферментативной активности.

Использование термостабильной ДНК полимеразы позволило проводить реакцию в циклическом режиме, осуществляя «плав­ление» образовавшейся двухцепочечной ДНК с последующим процессом достройки молекул на вновь образовавшейся матрице. Таким образом, каждый цикл удваивает количество искомой полинуклеотидной цепи. Проводя 10 — 20 циклов, можно накопить количество ДНК, достаточное для прямого наблюдения за ДНК физико-химическими методами.

Методика является уникальной и обеспечивает возможность обнаружения малых количеств патогенных микроорганизмов, ви­русов, выявления и идентификации генетических заболеваний.

Биолюминесцентный микроанализ. Наиболее чувствительными в биохимическом анализе являются методы, основанные на явле­нии биолюминесценции. Известны некоторые реакции, приводя­щие к образованию электронно-возбужденных состояний моле­кул, эмитирующих квант света.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".