Пользовательский поиск

Ферменты в аналитической химии

Ферментативный катализ внес существенный вклад в развитие аналитической химии сложных органических молекул. Традици­онная аналитическая химия ограничивается, как правило, созда­нием методов обнаружения, идентификации и количественного определения относительно простых химических соединений. Ис­пользование ферментов для целей аналитической химии качествен­но изменило ситуацию. Доступными для идентификации и коли­чественного определения стали сложные органические молеку­лы, белки, нуклеиновые кислоты. Высокая специфичность фер­ментов, их способность узнавать индивидуальные моле­кулы в сложных смесях обеспечили аналитическую химию новы­ми селектирующими агентами. Высокие скорости реакций, ката­лизируемых ферментами, позволяют усилить химический сигнал и существенно повысить чувствительность анализа.

Продолжение ниже

Ферменты в нетрадиционных средах. Мицеллярная энзимология

Ферменты в естественных условиях работают в водной среде или на границе раздела фаз мембрана — водная среда. Развитие ме­тодов химической ...

Читать дальше...

всё на эту тему


Ферменты в химическом анализе нашли широкое применение для решения разнообразных задач, включая анализ низкомолеку­лярных соединений в сложных биохимических смесях, количе­ственный анализ белков в сложных белковых композициях, каче­ственный и количественный анализ нуклеиновых кислот. Для про­ведения аналитической процедуры были разработаны несколько форматов, обеспечивающих высокую чувствительность и стандар­тизацию анализа. Наиболее известными и широко применяемыми аналитическими процедурами являются: ферментативный анализ метаболитов; анализ с использованием биосенсоров; иммуноферментный анализ;

Ферментативный анализ метаболитов

Основой аналитическо­го подхода является способность ферментов избирательно взаи­модействовать с одним или несколькими родственными соедине­ниями на фоне большого числа разнообразных веществ. Этот под­ход используют при проведении клинического и биохимического анализа, при оценке качества окружающей среды. Применение ферментов позволяет селективно определять в разнообразных био­логических жидкостях и тканях малые количества особо важных метаболитов, ингибиторов, лекарственных соединений, таких как аминокислоты, сахара, спирты, мочевина, мочевая кислота, хо­лестерин, нуклеотиды, антибиотики. При этом используют раз­нообразные физико-химические методы: спектрофотометрию, спектрофлюорометрию, люминесцентный анализ, электрохими­ческие методы.

На линейном участке накопления продукта « J) концен­трация продукта Р может быть измерена при фиксированном вре­мени реакции, что существенно упрощает процедуру анализа. Вер­хний предел обнаружения концентрации субстрата определяется константой Михаэлиса данного субстрата для данного фермента. Выше константы Михаэлиса скорость реакции слабо зависит или вообще не зависит от концентрации S. Предел обнаружения опре­деляется тем, с какой чувствительностью измеряется скорость ре­акции. Чем более активен фермент (высокие kK.dT) или чем боль­шую концентрацию фермента можно использовать (высокие зна­чения Ео), тем ниже предел обнаружения концентрации субстра­та. Для традиционного спектрофотометрического метода предел обнаружения составляет 10~6— 1СГ5 моль/л. Этого вполне достаточ­но для определения большинства метаболитов. (Для сравнения ука­жем, что концентрация глюкозы в крови изменяется в диапазоне 10~3— 10~2 моль/л.)

В аналитической биохимии часто используют сопряженные ферментативные реакции, в которых продукт первой реакции яв­ляется субстратом следующей. В большинстве случаев это делает­ся, чтобы повысить точность анализа, например, за счет того, что продукт второй реакции обладает лучшими оптическими или лю­минесцентными характеристиками или обладает более высокой электрохимической активностью. Как правило, второй фермент берут в большом избытке, с тем, чтобы вторая стадия не была лимитирующей.

Метод титрования субстрата ферментом. В некоторых случа­ях анализ можно упростить, если быстро перевести искомый суб­страт в продукт реакции. Условием проведения анализа является использование избытка фермента, что позволяет осуществлять этот процесс за разумное время.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".