Пользовательский поиск

Трансформация, трансфекция. Клоны и клонирование

Процесс введения вектора в клетку называют трансфекцией. Для этих целей необходимо применить один из методов, позволяющих довольно большой молекуле циклической ДНК проникнуть в клет­ку. Обычно трансфекцию осуществляют, предварительно обрабо­тав клетки концентрированным раствором хлорида кальция или хлорида рубидия. В этих условиях нарушается целостность клеточ­ной мембраны, что увеличивает вероятность введения вектора в клетку. Для этих целей также применяют электропорацию — про­никновение плазмид в клетку сквозь мембрану под действием элек­трического поля. Для больших клеток, например ооцитов, введе­ние ДНК может быть осуществлено механически с помощью иглы. Клетки, получившие новый ген, называются трансформирован­ными. В ряде случаев, особенно при использовании векторов на основе фагов, чужеродный ген может быть встроен в центральный геном организма и наследоваться при каждом делении клетки.

Продолжение ниже

Ферменты в нетрадиционных средах. Мицеллярная энзимология

Ферменты в естественных условиях работают в водной среде или на границе раздела фаз мембрана — водная среда. Развитие ме­тодов химической ...

Читать дальше...

всё на эту тему


Однако вероятность трансформации клетки с помощью того или иного вектора намного меньше единицы. В смеси после про­ведения операции трансфекции имеется большое число нетрансформированных клеток. Необходимо отделить клетки, несущие но­вый ген, от массы исходных клеток. Этот отбор осуществляют с помощью процедуры клонирования. Клон — это популяция клеток (вирусов, организмов), произошедшая из одного репродуциру­ющего (размножающегося) организма. Все члены клона являются потомками одной клетки и, по существу, ее точными копиями.

В целях выделения клонов бактериальных клеток, несущих нуж­ный исследователю ген, проводят разреженный посев клеток та­ким образом, что они образуют отдельные колонии (бляшки, просветы), которые хорошо видны. Для отделения клеток, про­шедших трансформацию, от нетрансформированных культивиро­вание ведут на средах, содержащих антибиотики. В том случае, если вектор содержит параллельный ген устойчивости к антибиотику, клоны дают только трансформированные клетки.

Полученный клон переносят в среды, предназначенные для эффективного размножения клеток, и получают их большую популяцию.

Таким образом, из одной или нескольких трансформирован­ных клеток удается получить популяции, включающие 105—106 клеток в 1 мл среды.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".