Пользовательский поиск

Бифункциональные сшивающие агенты. Получение конъюгатов белков и иммобилизация ферментов. Синтез пептидной связи

За последние десятилетия разработан большой набор реакций, позволяющих соединить белки химической связью или химически фиксировать белки или ферменты на носителях различной природы. Последний процесс называют иммобилизацией белка или фермента. Для этих целей используют различные бифункциональные сшивающие агенты.

Продолжение ниже

Ферменты в нетрадиционных средах. Мицеллярная энзимология

Ферменты в естественных условиях работают в водной среде или на границе раздела фаз мембрана — водная среда. Развитие ме­тодов химической ...

Читать дальше...

всё на эту тему


Диальдегиды. Глутаровый диальдегид. Часто для получения конъюгатов белков и химического связывания белка с носителем, содержащим свободную аминогруппу, используют бифункциональный агент, например глутаровый диальдегид.

Последующее восстановление азометиновых связей ведет к химически прочной фиксации белков или иммобилизации белка на носителе. Эту реакцию можно также использовать для получения внутренних дополнительных связей в белке путем химической модификации двух стерически доступных групп.

Реакция ведет к потере аминогруппы, а при pH 7, как правило, к потере одного положительного заряда.Для иммобилизации ферментов или белков на полисахаридных носителях (целлюлозе и ее производных, декстранах и др.) можно использовать реакцию введения оксогруппы в носитель путем окисления углевода периодат-ионом. Образовавшиеся альдегидные группы могут быть введены в реакцию с аминогруппами белка в нейтральной или слабощелочной среде с последующим восстановлением азометиновых связей боргидридом натрия.

Имидоэфиры. Диметилапидимидат. Для получения дополнительных внутренних связей в белке можно использовать бифункциональные агенты на основе имидоэфиров, в частности диметилапидимидат.

Карбодиимиды. Реактив Вудворда. Классический способ образования связи между карбоксильной группой и аминогруппой основан на использовании карбодиимидов. Реакция с участием дициклогексилкарбодиимида протекает в несколько стадий. Первая стадия — активация карбоксильной группы.

Другой распространенный подход к образованию пептидной связи был предложен Р. Вудвордом в 1961 г. Он использовал для активации карбоксильной группы изоксазолиевые соли, например N-этил-5-фенилизоксазолий-3-сульфонат.

Реакцию используют в пептидном синтезе, при получении конъюгатов белков, при иммобилизации ферментов. Для проведения реакции в воде используют водорастворимые производные дициклогексилкарбодиимида.

Понятно, что доступность функциональных групп аминокислоты определяет возможности ее модифицирования химическим агентом.

В качестве примера рассмотрим экспериментальные данные по химической модификации остатков гистидина в простагландин-Н-синтазе. Простагландин-Н-синтаза — лимитирующий элемент синтеза простагландинов. Фермент содержит 18 остатков гистидина. Однако химической модификации диэтилпирокарбоматом в апоферменте, т.е. в белке, не содержащем кофактор — гемин, подвергаются всего лишь шесть имидазольных групп. После того как белок присоединяет гемин и образуется холофермент, с диэтилпирокарбоматом взаимодействуют всего лишь две имидазольные группы гистидина. Таким образом, гемин дополнительно экранирует четыре имидазольные группы и делает их недоступными для модификации химическим агентом.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".