Пользовательский поиск

Возможные погрешности стереометрического анализа ультраструктур

Как было показано, при использовании методов линейного интегрирования и точечного счета абсолютная ошибка может быть точно определена по формулам (358) и (360), а ориенти­ровочный расчет числа отрезков или точек, необходимых для достижения допустимой, наперед заданной достоверности Р, можно произвести по формулам (359) и (361). Для ускорения работы С. А. Салтыков (1970) составил справочные таблицы, которые помещены в приложении.

Продолжение ниже

Анализ крови на ВИЧ

Существует ряд анализов, используемых для определения того, инфицирован ли человек ВИЧ, вирусом, вызывающим СПИД. Это включает анализ крови на антитела ...

Читать дальше...

всё на эту тему


Если при планировании стереологического исследования тре­буется оценить число точек или отрезков, то следует задаться вероятной абсолютной ошибкой, которая не должна превышать значение заранее обусловленной величины е, и по этой величи­не, а также по подсчитанной по 2—3 полям зрения или микро­фотографиям объемной доле анализируемых структур в единице объема ткани (в зависимости от выбранного вероятного уровня достоверности) определить необходимое минимальное число точек или отрезков.

Например, пусть объемная доля анализируемого структур­ного компонента ткани Vv составляет 20%, желаемая достовер­ность результата анализа = 0,9544 (или 95,44%), а абсолютная погрешность — 1 %. В указанных условиях необходимо подсчи­тать 6400 точек или отрезков. Учитывая, что в таблице коэффи­циент К принят за 1, а для изотропных систем его следует при­нять равным 0,65, получаем, что для изотропных систем, на­пример митохондрий в печеночной клетке, минимальное число измерений составляет 6400-0,65 = 4160. В случае анализа анизо­тропной системы (например, миофибриллы в кардиомиоцитах) коэффициент К следует принять равным 0,4 и минимальное чис­ло точек или отрезков составит 6400*0,4 = 2560.

С помощью проведенных форм и составлен­ных по ним таблицам можно определить погрешность уже про­веденного анализа и определить число точек или отрезков, ко­торые необходимо измерить для обеспечения заданной точности и достоверности намеченного анализа. Последнее имеет важное значение в планировании стереологического анализа и выборе оптимального количества анализируемого материала и адекват­ных ему методов стереологии. В формулы входит произведение I/v(100—Vv), значение которого приведено в табл. XIV Прило­жения.

Методы определения объемных характеристик, представлен­ные выше, достаточно эффективны и дают воспроизводимые ре­зультаты. При их использовании возможны ошибки системати­ческие, вызванные применяемой техникой, материалами, мето­дами, и статистические ошибки.

Об анализе статистических ошибок сказано выше. Следует еще раз указать на их причины и способы устранения. Систе­матические ошибки могут быть обусловлены следующими при­чинами:

  1. особенности обработки ткани (фиксация, дегидратация, заливка); этих ошибок можно избежать тщательным приготов­лением растворов, доведением их до изотоничности, стандарти­зацией процессов проводки кусочков ткани. При сравнительных исследованиях эта ошибка может быть максимально уменьшена одновременной проводкой сравниваемых объектов;
  2. деформация срезов в процессе резки. Однако если нож достаточно острый и заливка произведена правильно, т. е. плотность заливочной среды, фиксированной и залитой ткани при­мерно одинакова и срезы хорошо расправлены, то ошибка мо­жет быть сведена к минимуму;
  3. изготовление фотографий. Ошибки, связанные, с одной стороны, с техникой, используемой при печати (качество опти­ки), а с другой — с механическими свойствами фотобумаги. Уменьшить эту ошибку, а тем более устранить ее практически невозможно, так как фотобумага дает определенную усадку в процессе сушки. Однако при желании всегда можно определить поправочные коэффициенты;
  4. техника микроскопического исследования (светооптиче­ский и электронный микроскопы) вносит ошибку в определение мерных признаков гистологических объектов из-за погрешностей юстировки и настройки, а также хроматической и сферической аберрации. Уменьшение этой ошибки достигается тщательной юстировкой и настройкой аппаратуры;
  5. ошибки, связанные с неправильным выбором увеличения и толщины линий и точек тест-системы, что способствует непра­вильному отнесению точек или линий к изучаемой структуре. Правильное увеличение в соответствии с выбранной тест-системой значительно снижает ошибку анализа. Как указывалось выше, увеличение должно быть таким, чтобы размеры изучае­мой структуры, видимые под микроскопом, были в 50 раз боль­ше, чем видимые размеры линий или точек.
  6. Толщина среза. Стереологические принципы и методы справедливы на плоскости, т. е. применительно к двумерным препаратам. Поскольку гистологический срез, строго говоря, не является таковым, его толщина также вносит систематическую ошибку. Эффект Холмса позволяет ввести корректирующие ко­эффициенты. Как правило, этим эффектом можно пренебречь, если это отношение значительно меньше 1.

При стереометрическом анализе возможны ошибки статисти­ческого характера:

  1. нарушение принципа сохранения представительности па­тологического процесса на всех уровнях морфологического ис­следования [Автандилов Г. Г., 1980] и отсутствие репрезента­тивности кусочка ткани и среза ко всему органу. Уменьшение ошибки в этом случае может достигаться увеличением размеров кусочка ткани, числа изучаемых кусочков и срезов, анализируе­мых микрофотографий или полей зрения, а также увеличением плотности точек на тест-системе. Поскольку такая многоплано­вая зависимость трудно поддается анализу и вызывает сложно­сти в выборе оптимальных размеров кусочка ткани и площадей анализируемых участков, к данному вопросу следует отнестись очень серьезно, особенно при очаговых поражениях в изучаемом органе. В этом случае необходимо производить поэтапное мор­фометрическое исследование на всех иерархических уровнях организации живой материи в отдельности с последующим анализом всех уровней в целом. Такой подход позволяет пол­ностью избежать субъективности суждений и ложных выводов [Автандилов Г. Г. и др., 1981];
  2. недостаточное количество материала (экспериментальные животные аутопсии, биопсии) для исследования. В общем это количество зависит от условий эксперимента и цели исследова­ния и не оказывает прямого влияния на морфометрический ана­лиз. Естественно, надо получить средние морфометрические параметры, характеризующие не отдельного индивидуума, а всю группу;
  3. ошибки, непосредственно связанные с самим процессом подсчета точек и линий, т. е. зависящими от индивидуальных качеств исследования, а также от используемой им счетной ап­паратуры;
  4. измерение толщины среза. Т. Zelander, R. Ekholm (1960) показали, что средняя толщина метакрилатовых срезов изменя­ется в зависимости от стадии исследования. Если до обработки средняя толщина среза была 472 А, то в вакууме она стала 425 А, а после воздействия электронов — 208 А (уменьшилась почти на 60%).



© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".