Пользовательский поиск

Метод точечного счета в медицинской морфометрии

Сущность этого метода заключается в том, что измерение длины отрезков так же, как и измерение площадей ультраструк­тур, заменяется дифференцированным подсчетом числа точек тест-системы, соответствующих изучаемым классам анализируе­мых структур. Если множество точек распределено случайно, но равномерно по всей площади среза ткани, содержащей изу­чаемый компонент в объеме Vv, то часть точек, приходящихся на исследуемые структуры, также будет равна Vv. Это положе­ние вытекает из принципов теории вероятности. Следует отме­тить, что простота выполнения и высокая точность стереометри­ческого анализа точечным методом сделали его предпочтительным и в работе патологоанатома [Автандилов Г. Г., 1973, 1980, 1984].

Продолжение ниже

Медицинская морфометрия

... «ко­личественная морфология» — раздел морфологии, использую­щий математический анализ изменений формы изучаемых объ­ектов на базе системной морфометрии и стереометрии. Мор­фометрия — часть метрологии (науки об измерениях)—уче­ние о правилах применения количественных характеристик ...

Читать дальше...

всё на эту тему


Так же, как и при описанном выше методе, анализ можно проводить, пользуясь различными окулярными вставками. С помощью любого счетчика производят дифференцированный подсчет точек, попадающих на изучаемые ультраструктурные компоненты клеток. Эти данные записываются и отмечается общее число точек, используемых в тест-системе. Проведя под­счет на одном поле зрения, с помощью рукояток перемещения объекта скачкообразно изменяют поле зрения и подсчет повто­ряют. Во избежание предвзятого выбора участка среза поле зрения надо изменять, оторвавшись от микроскопа, «вслепую». Анализу необходимо подвергать несколько полей зрения, более или менее равномерно распределенных по всей площади среза.

Количественный анализ можно проводить и с помощью оку­лярной вставки с перекрестом (или объект-микрометром). Для этого, произвольно меняя положение препарата относительно перекреста (или перемещая перекрест винтом), каждый раз учитывают, на какую из структур попала точка перекреста. Та­кой способ дает довольно надежные результаты. Предложены специальные сетки для электронных микроскопов [Автанди­лов Г. Г. и др., 1984].

При изучении редко встречающихся структурных компонен­тов (лизосомы, микротельца, липидные включения), составляю­щих менее 5% всех компонентов, минимальное число точек, которое необходимо подсчитать для относительной ошибки ана­лиза менее 5% (при Р = 0,95), резко возрастает.

В этом случае следует воспользоваться методом «полей», предложенным А. А. Глаголевым (1941). На одно поле зрения микроскопа или на одну микрофотографию участка среза на­кладывается не одна точка перекреста, а тест-система, состоя­щая из множества точек. Таким образом достигается значи­тельное уменьшение числа полей зрения или микрофотографий, которые необходимо проанализировать для обеспечения задан­ных условий точности и достоверности. Метод «полей» значи­тельно расширяет возможности стереологического анализа для оценки незначительных количеств структурных компонентов клеток и тканей. Однако при использовании метода «полей» получается групповое расположение точек и, следовательно, нарушается принцип равномерного распределения точек по всей плоскости среза. Значит, точность метода зависит не только от общего числа точек, но и от колебания в содержании анализи­руемых структурных компонентов клеток и тканей в различных полях зрения. Фактическая погрешность будет превышать рас­четную тем больше, чем неравномернее распределены изучаемые структуры на плоскости среза и в объеме ткани. Здесь следует учесть принцип иерархического разделения биологических структур на уровни, в пределах которых изучаемые структуры будут распределены равномерно [Невзоров В. П., 1979; Автан­дилов Г. Г. и др., 1984].

Для стереологического анализа методом «полей» по микро­фотографиям используются тест-системы, нарисованные на про­зрачной пластинке из оргстекла либо нанесенные непосредст­венно на фотографию.

Тест-систему выбирают в соответствии с поставленной зада­чей. Расположение точек на ней не обязательно регулярное. Естественным требованием должно быть как можно более рав­номерное их распределение по площади препарата.

После наложения тест-системы ведут дифференцированный подсчет точек, попадающих внутрь профиля каждого класса анализируемых ультраструктур. Изучив одну микрофотографию, переходят к другой, и так анализ на микрофотографиях повто­ряют до получения заранее заданной степени точности. Расчет необходимого количества микрофотографий и точек для обеспе­чения заранее поставленных условий точности и достоверности приводится ниже. Поскольку точность анализа зависит от числа точек, соответствующих анализируемым структурам, следует сказать несколько слов о выборе шага решетки (расстояния между соседними точками во всех направлениях). Необходимое число точек, в принципе, можно получить и на одной микрофо­тографии или на одном поле зрения, расположив эти точки до­статочно густо. Однако такой анализ неэффективен, так как результаты не воспроизводимы на соседних полях зрения либо на других микрофотографиях того же среза. В силу этого необ­ходимой точности исследования следует добиваться не путем увеличения числа точек в одном поле зрения и не уменьшением расстояния между точками, а увеличением числа анализируе­мых полей зрения или микрофотографий. Следовательно, сред­нее расстояние между точками рационально выбирать так, что­бы на каждую из анализируемых органелл и внутриклеточных включений попадала одна точка, т. е. это расстояние должно быть равно среднему размеру анализируемой ультра структуры.

Используя метод «полей» при подборе увеличения, следует учитывать, что увеличение должно быть таким, чтобы величина изучаемой совокупности ультраструктурных компонентов клет­ки не менее чем в 50 раз превышала толщину линий тест-сис­темы или линий окулярных вставок. Несоблюдение данного условия затрудняет процесс стереологического анализа из-за большой зрительной нагрузки исследователя, что в конечном итоге сказывается на точности анализа. Это связано с невоз­можностью точной идентификации принадлежности точки той или иной изучаемой микроструктуре.

По полученным данным вычисляется объемная доля иссле­дуемого структурного компонента. Этот показатель представля­ет собой величину, показывающую, какую долю объема ткани занимает исследуемый компонент в единице объема цитоплазмы или ткани.

Как уже отмечалось, точность и достоверность результатов морфометрического анализа для заданной ультраструктуры оп­ределяются однозначно общим числом подсчитанных точек. Число точек, необходимое для обеспечения заданной точности и достоверности, можно определить, исходя из общих положе­ний теории вероятностей.

Если обозначить анализируемый структурный компонент на срезе, площадь которого принимается за 100%, через Vv, а чис­ло точек, равномерно распределенных по всей площади среза, через z, то вероятность Р попадания одной точки на интересую­щую нас структуру определится как случайное событие:

Задаваясь значением нормированного отклонения t, величи­ной абсолютной погрешности є и определенным приблизительно по 2—3 полям зрения или микрофотографиям, Vv можно опре­делить число точек z, которое необходимо подсчитать для обес­печения заданных условий точности и достоверности. В даль­нейшем при подсчете этого количества точек, когда величина Vv будет экспериментально определена более точно, следует уточнить величину абсолютной погрешности е, и если она ока­жется выше желаемой, продолжить анализ.

При анализе структурных компонентов клетки, содержание которых менее 1%, число точек z, необходимое для получения заданной величины погрешности, может составлять несколько десятков тысяч, так как в этом случае мы имеем дело с редки­ми событиями, демонстрирующимися распределением Пуассона. Следовательно, для анализа редко встречающихся структур необходимо использовать другие методы стереологии. Если со­держание исследуемых структур в единице объема ткани менее 0,1%, то количество подсчитанных точек возрастает настолько, что применение метода «полей» становится неэффективным и анализ предпочтительно проводить планиметрическими метода­ми, несмотря на их трудоемкость [Автандилов Г. Г. и др., 1981].

В данном примере соблюдения поставленных условий для митохондрий возможно при анализе 106 микрофотографий, т. е. должна быть проанализирована площадь среза, равная 106X Х94,1 «9974,6 мкм2. Если использовать увеличение в 4 раза меньше, что вполне приемлемо для изучения митохондрий, то число микрофотографий, необходимых для ана­лиза, уменьшится до 27 (106:4«27).

Иначе обстоит дело с анализом эндоплазматической сети. В этом случае снижать увеличение нерационально, так как ста­нут неразличимыми отдельные цистерны эндоплазматической сети. Это приведет к заниженным результатам, поскольку не будет удовлетворено условие наложения 1—2 точек на каждый исследуемый компонент. Следовательно, шаг тест-решетки не­обходимо уменьшить приблизительно в 10 раз, соответственно во столько же раз возрастает число точек, совпадающих с ана­лизируемыми структурами, т. е. вместо 43 точек получим 430, а значит, и число микрофотографий, необходимых для анализа, составит 13 (5511:430 «13).

При таком подходе можно определить нужное число микро­фотографий для стереометрии каждой ультраструктуры цито­плазмы, а при работе с гистологическими срезами — число по­лей зрения.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".