Пользовательский поиск

Стереометрический анализ компонентов биологических объектов

Излагаемые в настоящем разделе методы используются при любом типе ориентировки микрообъектов обычных срезов. Если объекты не имеют предпочтительной или жесткой ориентировки, то срезы можно готовить в любой плоскости по отношению к одной из поверхностей кусочка. Если в препарате имеются микрообъекты с предпочтительной или жесткой ориентировкой, то срезы рекомендуется готовить в плоскости, перпендикуляр­ной по отношению к оси ориентировки таких микрообъектов. Если в объекте имеется несколько осей ориентировки элементов,, например в двух плоскостях, то среды для анализа также изго­товляют в двух плоскостях, перпендикулярных двум установлен­ным осям ориентировки. Затем проводят стереометрический анализ отдельно на каждом из двух выделенных подмножеств; срезов тех структур, которые лежат перпендикулярно плоскости: среза. Результатом измерений в таком случае будет сумма: результатов замеров на первом и втором подмножествах [Ав­тандилов Г. Г., Гевондян Т. А., 1977].

Продолжение ниже

Анализ крови на ВИЧ

Существует ряд анализов, используемых для определения того, инфицирован ли человек ВИЧ, вирусом, вызывающим СПИД. Это включает анализ крови на антитела ...

Читать дальше...

всё на эту тему


Объемные отношения

Используемый для этой цели линейный интеграционный ме­тод основан на том, что отношение длины линий, приходящихся, на компоненты ткани, соответствует отношению их объемов.

Более прост способ просчитывания точек контрольной систе­мы окуляра, приходящихся на соответствующие гистоструктуры. Обычно используют окулярные вставки, имеющие 5 точек в поле зрения, 25 точек в шестиугольной сетке, 121 точку в квадрат­ной сетке, сетки с 25 и 100 точками, квадратно-сетчатые вставки £ 289 точками и др. [Автандилов Г. Г. и др., 1981].

Определение удельных площадей и объемов структурных компонентов

При светооптическом и электронно-микроскопическом иссле­довании определение этих параметров проводится с помощью тех же методов, что и на органометрическом уровне исследова­ния. Только когда плотность упаковки (удельная площадь, удельный объем) данного класса микрообъектов очень мала, например меньше 5%, следует отдать предпочтение методу ли­нейного интегрирования. Это связано с тем, что с уменьшением плотности упаковки совокупности микрообъектов число необ­ходимых подсчетов точек для получения репрезентативных: (в 95% доверительном интервале) данных значительно возра­стает.

Например, при объемной плотности 5% для получения досто­верного результата нужно подсчитать в общей сложности не ме­нее 3500 точек. Если доля данного компонента еще ниже, то число подсчетов точек возрастает до десятков и сотен тысяч. При этом на обработку каждого препарата затраты времени; резко возрастают. В других случаях редко встречающийся эле­мент следует объединить с каким-либо другим структурным компонентом, также занимающим по объему малую часть пре­парата.

Суть метода линейного интегрирования состоит в том, что по какой-нибудь одной линии известной длины определяют ту ее часть, которая приходится на микрообъекты данного класса. После этого, как и при методе «полей», для оценки плотности упаковки данного класса микрообъектов часть длины линии, приходящейся на микрообъект, делят на общую длину линии. Измерения проводят неоднократно, затем составляют вариаци­онный ряд, и данные обрабатывают методами вариаци­онной статистики. Технически этот метод реализуют следующим образом. На предметном столике микроскопа устанавливают препаратоводитель, движения которого в одной плоскости мо­гут осуществляться рядом винтов, отградуированных в линей­ной шкале. В окуляр микроскопа помещают вставку с пере­крестом. Гистологический препарат фиксируют в препарате-водителе, все его винты устанавливают в нулевое положение. Набор винтов 1—2—3—4 служит для линейного интегрирова­ния. Винт 5 используют для стандартного перемещения препа­рата после проведенной процедуры интегрирования в направ­лении, перпендикулярном плоскости интегрирования. Каждому винту 1—2—3—4 приписывают разные структурные компоненты ткани. Каждый из винтов 1—4 вращается до тех пор, пока перекрест окуляра микроскопа находится в пределах соответствующего ему тканевого компонента. Как только перекрест оку­лярной вставки выходит за пределы данного объекта, препарат передвигают другим винтом, соответствующим другому приписанному ему структурному компоненту. После завершения инте­грирования по одной линии препарат с помощью винта 5 препаратоводителя переводят в другое положение, после чего ли­нейное интегрирование продолжают. Калибровка линейного интегратора необязательна, так как плотность каждого класса структурных составляющих препарата выражается в относи­тельных единицах. Такой столик удобен и тогда, когда в одном поле зрения микроскопа надо измерить до 4 структурных ком­понентов. Необходимую для этих целей калибровку проводят с помощью объект-микрометра, который вставляют в гнездо препаратоводителя на место гистологического среза.

Если плотность тканевых компонентов объекта наблюдения можно изучить с помощью метода «полей», то этому способу всегда отдают предпочтение. Отметим, что в морфологических исследованиях редко встречаются такие структуры, для изуче­ния которых метод «полей» неприменим.

Все статистики распределения абсолютных объемов струк­турных элементов тканей, полученные на гисто-, цито-, ультра-структурометрических уровнях получают аналогично оценке их абсолютных объемов. Другими словами, объем ткани, в которой устанавливают содержание данного класса микрообъектов в ви­де их абсолютного объема следует умножить на статистики удельных объемов данного типа микрообъектов.

Для этих исследований пригодны все типы квадратно-сетча­тых окулярных вставок. Если данный класс микрообъектов име­ет малый удельный вес в ткани органа данного типа и характе­ризуется малыми размерами, следует применять решетки с точ­ками. В особо ответственных случаях используют сетки с точ­ками нулевой толщины.

Схема проведения стереометрического исследования одина­кова при использовании как метода линейного интегрирования, так и метода «полей».

Вся структура, анализируемая под микроскопом, рассмат­ривается в виде объединения подмножеств структурно-функциональных элементов данного уровня исследования.

Точки сетки (или фрагменты линии), накладываемые на структуру для проведения анализа, представляются в виде объединения подмножеств точек, приходящихся соответственно на изучаемые классы структурно-функциональных элементов данного уровня исследования. Зависимость между величиной структурно-функциональных элементов объекта исследования и числом точек (фрагментов линии), приходящихся на них, а также между общей величиной препарата и всем числом при­ходящихся на него точек может быть записана рядом зависи­мостей по числу выделенных классов элементов данного уровня исследования, что позволяет определить объемную плотность данного структурного компонента ткани в объеме органа.

Для получения представительных сведений по плотности упа­ковки исследуемых классов структурных компонентов образца при проведении анализа методом «полей» необходимо число то­чек и число измерений линий (при использовании метода ли­нейного интегрирования) набирать не в одном поле зрения микроскопа и не на одном срезе. Например, при использовании метода «полей» теоретически наиболее удачно, если на одно поле зрения микроскопа приходится всегда одна точка. По­скольку при этом анализ затрудняется, в одном поле зрения используют большее число точек. В оптимальном варианте окулярная сетка-вставка содержит не более 25 точек. При этом малая плотность точек в окуляре облегчает под­счеты одного поля, а малое число точек, расположенных в поле зрения, приводит к необходимости измерения большого числа полей, что объективизирует исследование. Если с помощью сет­ки с 25 точками изучать на одном препарате не более чем по 5 полей, то всего будет подсчитано 125 точек. Тогда необходи­мое число подсчетов точек получают посредством увеличения числа изучаемых гистологических препаратов. Необходимое чис­ло точек делят на число точек, подсчитываемых на одном срезе, и определяют нужное число срезов. Затем найденное число срезов делят на число участков органа, из которых готовились данные срезы, частное дает число срезов для каждого участка, которые должны подвергаться обработке. Если из каждого участка было приготовлено больше срезов, чем требуется для проведения анализа, то в каждой совокупности срезов нужные данные по­лучают с использованием таблиц случайных чисел.

Например, проведем объемный анализ легкого и определим общий объем капилляров альвеол. Для этих целей методом «по­лей» выполним измерения на нескольких стереометрических уровнях исследования и определим удельный и абсолютный объем паренхимы легкого, через него установим удельный и абсолютный объем межальвеолярных перегородок, а затем, ис­пользуя эти данные, определим удельный и абсолютный объем альвеолярных капилляров. Пусть объем легкого составляет 3500 см3. Разрежем его на ряд пластин толщиной 1 см, парал­лельных друг другу и перпендикулярных корню органа. Прове­дя планиметрический анализ методом «полей» на данном уров­не, а также выполнив статистический анализ методами альтер­нативной статистики, установим, что на паренхиму приходится 0,9045 объема легкого при абсолютном объеме 3500x0,9045 = 3165,74 см3. Отобрав из блоков легкого участки для приготов­ления гистологических препаратов согласно методу случайного бесповоротного отбора проб (с помощью наложения нумерован­ной сетки), изготовим из этих блоков гистологические препара­ты, из которых случайно отберем достаточное число срезов для стереометрического исследования. При увеличении в 100 раз тем же методом «полей» на препаратах определим односистем­ный объем межальвеолярных перегородок в паренхиме легкого. Пусть доля составила 0,1012, тогда абсолютный объем межаль­веолярных перегородок будет равен 3165,74x1012 = 320,37 см3. Далее при увеличении микроскопа 950 оценим тем же методом объемную плотность альвеолярных капилляров, которая соста­вила 0,7659 объема межальвеолярных перегородок. Произведе­ние 320,37x0,7659 = 245,37 см3 является абсолютным объемом альвеолярных капилляров.

В данном примере для упрощения не определялись данные для паренхимы легкого, межальвеолярных перегородок и аль­веолярных капилляров, которые можно найти по соответствую­щим формулам.

Метод планиметрии распространяется на все уровни иссле­дования, в том числе и на ультраструктурный, системному ана­лизу которого посвящена специальная глава.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".