Пользовательский поиск

Случайный отбор участков органа и органометрический анализ

Сведения об общих принципах структурной организации органа по данным исследования его тканевых составляющих, имеющих разную величину, устанавливаемую в различных ин­тервалах — от анализа с помощью лупы до изучения в электрон­ном микроскопе, обычно получают на отдельных участках, кото­рые в десятки, сотни, тысячи и более раз меньше самого органа. Эти сведения обычно переносят на весь препарат и ис­пользуют для обобщающих выводов. Между тем в литературе на­коплено много данных об ошибочности выводов, полученных при изучении только «типичных» участков [Griffitis D., 1971]. В свя­зи с этим возникла необходимость разработки объективного способа получения участков органов для исследований, кото­рый позволил бы выбрать наиболее представительный отдел. Эта проблема оказалась еще более актуальной в связи с внед­рением в практику морфологических исследований количествен­ных подходов, поскольку дистанция между стройной теорией метода и доказательствами и традиционным способом получе­ния образцов из органов остается большой.

Продолжение ниже

Анализ крови на ВИЧ

Существует ряд анализов, используемых для определения того, инфицирован ли человек ВИЧ, вирусом, вызывающим СПИД. Это включает анализ крови на антитела ...

Читать дальше...

всё на эту тему


Следовательно, необходимо строго соблюдать упомянутый «принцип изучения патологического процесса на всех уровнях морфологического исследования.

Первая стадия отбора образцов для стереометрии заклю­чается в изготовлении серии блоков из органов. Е. Weibel и сотр. (1963) при изучении легкого, например, приготавливали N пластин объемом 3—5 см3 и вытаскивали случайный кусок п (5<я<10). Отбор надо построить так, чтобы каждая пластина «мела равный шанс быть отобранной. Из всех отделов пластилы брали кусочки для 12—20 блоков. Затем изготовляли из них срезы толщиной 7 мкм и слепым случайным отбором полу­чали для морфометрии 5 стекол.

Другой способ заключался в том, что на пластину легочной ткани накладывали прозрачную линейку с сеткой, имеющей ну­мерованные квадраты со стороной 1,5 см. Кусочки иссекали по этим квадратам, используя случайные числа. Микроскопию препарата и измерения начинали со случайно установленного участка среза. Данные измерений по всем срезам подвергали статистической обработке. Более обоснованный подход приво­дится ниже.

Допустим, что структурная организация органа объемом V изучается на тканевых блоках, общий объем которых равен vn. Эти блоки могли быть отобраны как по желанию исследовате­ля, так и на основе вероятностного подхода. В обоих случаях результаты опыта будут распространены на весь объект.

Наиболее верен подход, при котором каждому блоку, иссе­каемому из органа, представлены одинаковые шансы быть выбранным для дальнейшего гистологического исследования.

Например, оценка морфологической перестройки при опре­деленном заболевании (для простоты будем считать изменения диффузными) органа, объем которого составляет 50 см3, прове­дена при изучении 100 серийных гистологических срезов, полу­ченных из 5 блоков. Толщина каждого гистологического препа­рата составляет 10 мкм при площади среза 1 см2. В этом слу­чае выводы о морфологических изменениях в органе будут сделаны по доле, общая величина которой составляет только 0,0002 объема всего органа. Отметим, что один гистологический срез такой же величины, изготовленный из кусочка печени че­ловека, составляет только 15-10-6 часть органа. Нетрудно пред­ставить, насколько уменьшается изучаемая доля органа при электронно-микроскопическом исследовании и насколько возрас­тает вероятность ошибочных заключений. Иллюстративная часть работы без оценки представительности этой иллюстрации мало­информативна.

Выбор репрезентативных тканевых блоков органа, способ получения представительных гистологических препаратов, а за­тем и отбор поля при светооптическом и электронно-микроско­пическом исследовании с определением нужных участков для анализа имеют большое значение в планировании и проведении количественного морфологического исследования. Однако этому важному этапу в обычных гистологических исследованиях, к со­жалению, не уделяют внимания.

Задача выбора представительных блоков Vi для исследова­ний может быть сведена к задаче формирования репрезентативной выборочной совокупности по законам статистики. Следова­тельно, из этой совокупности, в которой каждый участок органа имеет свой порядковый номер, нужно случайным (бесповторным или повторным) образом отобрать достаточное число бло­ков. Заметим, что для целей морфологического исследования более приемлем метод случайного бесповторного отбора, кото­рый каждому участку (кусочку) органа предоставляет одинако­вые шансы быть взятым для дальнейшего гистологического изу­чения.

Практическое применение этого метода состоит в следую­щем. Орган рассекают на пластины заданной толщины (обычно толщина соответствует высоте кусочков, которые впоследствии будут вырезаны для гистологического исследования). Такое рас­сечение следует выполнить в плоскостях, перпендикулярных сосудам, нервам, протокам. Направление плоскости рассечения органа особенно важно, когда проводят планиметрический ана­лиз методом «полей» пластин сердца. Полученные пластины плотно укладывают на плоскости и на них накладывают ре­шетку с пронумерованными прямоугольными или квадратными клетками.

Затем по таблице равномерно распределенных случайных чисел выбирают номера блоков в зара­нее намеченном количестве. Если под выбранными по таблице случайных чисел клетками находятся отделы органа, которые не могут быть исследованы (артефакты и др.), то блоки заме­няются новыми. В этих случаях по числам этой же таблице проводят дополнительный отбор клеток решетки и соответст­вующих им участков органа. После того как нужные участки органа отобраны, т. е. определено их положение под соответст­вующими клетками решетки, их вырезают бритвой или с по­мощью специального ножа Автандилова. Дублирую­щие участки также получают способом случайного отбора проб.

Например, выбор участков из почки для приготовления гистологических препаратов. Почка рассечена на пластины толщиной 1 см, которые уложены рядом, на них на­ложена решетка, имеющая квадраты площадью 1 см2, с нуме­рацией от 1 до 35. По таблице случайных чисел отбирают номера квадратов, под которыми должны быть вырезаны участ­ки органа для приготовления гистологических блоков, а за­тем — срезов. Для исследования достаточно было взять 3 участ­ка. Поскольку из таблицы случайных чисел получены номера 10, 23 и 35, а на клетку с номером 35 не приходится ткань почки, этот номер по таблице заменили новым, соответствую­щим 19-му квадрату. Таким образом, участки почки, располо­женные под клетками решетки с номерами 10, 19 и 23, являют­ся случайной выборкой из органа и должны быть вырезаны для приготовления гистологических препаратов.

Изложенный принцип отбора применим для органов одно­родного морфологического строения или для тканей с однород­ными патоморфологическими изменениями. Один и тот же орган в зависимости от задач исследования может рассматриваться как состоящий из тканей одного рода либо в нем могут быть выделены все определяемые подмножества тканевых составляю­щих. В приведенном выше примере отбора репрезентативных участков почка рассматривалась как орган с компонентами од­ного типа и не выделялись корковое, мозговое вещество, лохан­ка и жировая ткань. Если такая задача поставлена в исследо­вании, то отбор блоков из разных отделов почки следует прово­дить согласно приводимому ниже способу.

Если объем органа может быть разделен на выявляемые на органометрическом уровне подмножества тканей разного типа или в органе выражен очаговый патологический процесс, прин­ципы отбора препаратов для исследований должны быть из­менены.

Если орган состоит из структурных составляющих, четко дифференцируемых на органометрическом уровне, и исследова­тель должен выбрать участки для анализа из какой-либо опре­деленной структурной составляющей (например, из коркового вещества почки) или имеется очаговое поражение, то объем органа V рассматривают в виде двух подмножеств элементар­ных объемов Vi и 1/2, каждому из которых по описанному выше способу предоставляют одинаковые шансы быть отобранными. Если требуется изучить очаговые патологоанатомические изме­нения в какой-либо структурной составляющей органа, диффе­ренцируемой на макроскопическом уровне исследования, то ее объем разделяют на два подмножества: Ун — объем, приходя­щийся на относительно не измененную часть данного вида ткани органа, и Уп, приходящийся на патологически измененные от­делы.

Принципиальная схема случайного отбора проб, разобран­ная на примере двух подмножеств тканевых составляющих, ана­логична и для случая с разделением объема органа на большее число подмножеств структурных составляющих, дифференцируе­мых на макроскопическом уровне в виде очаговых поражений (например, метастазы и т. д.). Нужно учесть необходимость четкого определения их границ. Другими словами, выделяемые подмножества всегда должны быть «непересекающимися», т. е. не иметь общей части. Методика отбора препаратов в этом слу­чае не имеет принципиальных отличий от описанной выше.

Всю решетку, наложенную на плотно упакованные на плос­кости пластины, условно разделим на две решетки сообразно расчленению объема органа на неизмененные и патологически измененные отделы. Это будет решетка, приходящаяся на структуры органа с относительно нормальным морфологическим строением, и решетка, наложенная на ткань с очаговыми изме­нениями.

Блоки для исследований будем отбирать с использованием таблиц случайных чисел отдельно для первой и второй решеток, т. е. отдельно для нормальных и очагов измененных тканей. При отборе чисел, не попадающих в данную решетку, будем их отбрасывать и заменять новыми.

Например, почка с очаговыми изменениями рассечена на пластины перпендикулярно ее воротам. Наложена решетка с клетками, имеющими нуме­рацию от 1 до 35. Данную решетку условно делим на две. Пер­вая из них состоит из клеток с номерами 1, 2, 4, 5, 8, 10, 11, 13 исоответствует той части органа, которая не вовлечена в па­тологический процесс. Другая решетка представлена клетками с порядковыми номерами 2, 9, 18, 19, 20, 22, 23, 26, 27, лежащими над патологическими участками и соответствует части почки, в которой обнаруживаются очаговые патологоанатомические из­менения. По таблице случайных чисел отбираем участки почки из той ее части, в которой имеются очаговые изменения, т. е. на которую наложена вторая решетка. С использованием таблицы случайных чисел установим номера клеток данной решетки, под которыми следует вырезать участки органа для исследований. Пусть это клетки с номерами 12, 22 и 33. Под этими клетками иссекают участки почки для приготовления блоков и гистоло­гических препаратов.

Если изучаемый орган имеет плоскую форму, то решетка с пронумерованными квадратными клетками накладывается не­посредственно на его поверхность. Полый орган можно вскрыть и развернуть.

Описанные способы отбора участков органов с целью полу­чения блоков для изготовления гистологических препаратов поз­воляют избежать субъективизма и обеспечивают репрезентатив­ность случайной выборки частей органа и патологических изме­нений.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проекте Карта сайта β На здоровье! © 2008—2017 
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".