Пользовательский поиск

Примеры применения тестовых систем в стереометрическом исследовании

Приведем основные примеры применения тестовых систем в стереометрическом ис­следовании. Исходя из принципа Delesse, по которому объем фракций Vv компонента і в ткани может быть оценен посредст­вом измерения площади фракции Аа, занимаемой поперечным срезом і (выбранный наугад срез).

Продолжение ниже

Доклад рабочей группы по будущим направлениям исследований в области профилактики и лечения ожирения у детей

... фенотипическому выражению ожирения, и отметила, что генетические варианты, связанные с детским ожирением и сахарным диабетом 2 типа, а также исследования семейных связей были описаны в литературе. Избыточный вес и ожирение достигло эпидемических масштабов и стало основной ...

Читать дальше...

всё на эту тему


На практике площадь Ал{ определяется посредством плани­метрии. A. Rosival (1898) показал, что эта площадь может быть оценена посредством линейной интеграции, оп­ределяющей линейную часть LLi, и посредством контрольных линий, проходящих через поперечный срез І. А. А. Глаголев (1933, 1934) доказал, что планиметрия может быть проведена путем наложения на срез сетки, состоящей не из линий, а из точек, и подсчетом их совпадений с изучае­мыми структурами. Н. Chalkley (1943) и G. Attardi (1953) предложили сходные методики для применения в ги­стологии.

В некоторых случаях требует­ся оценка абсолютных площадей структурных составляющих плос­костного препарата, регистрируе­мых на органном уровне [Автан­дилов Г. Г., 1960; Сталиорайтите В. И. и др., 1986, и др.]. Ши­роко используются планиметри­ческие линейки с площадью каж­дого гнездового квадрата 1 мм2 [Автандилов Г. Г., 1960]. Они изготавливаются так же, как ре­шетки с узловыми точками или сетки с квадратами.

В связи с изложенным пред­ставляет несомненный интерес изготовление специальных технических средств для количествен­ного морфометрического анализа биологических препаратов. Для этих целей могут быть изготовлены линейки и сетки по типу используемых в количественной металлографии [Салты­ков С. А., 1976]. К ним относят окулярные вставки с линиями известной длины и вставки, ограничивающие поле зрения мик­роскопа, имеющие нулевую толщину. В таких вставках линией служит граница между светлым и темным полем зрения микроскопа, а точкой — граница раздела светлого и темного поля вершин треугольников. Эти линии не имеют ника­кой толщины. Однако квадратно-сетчатая окулярная вставка нулевой толщины, хотя и снимает погрешность, связанную с ко­нечной толщиной гистологического препарата, все же не уст­раняет погрешностей, связанных с разными расстояниями меж­ду прямыми и диагональными расстояниями между узловыми точками. Следует отдать предпочтение сетке, узловые точки которой имеют не только нулевую толщину, но и находятся на одинаковом расстоянии друг от друга, что создает одинако­вую плотность точек для разных участков решетки [Автанди­лов Г. Г. и др., 1977], окулярным вставкам с равноудаленными точками и другим вариантам тестовых систем (рис. 12).

В исследовательской патологоанатомической работе оправ­дала себя окулярная измерительная сетка для цитогистостереометрических исследований [Автандилов Г. Г., 1972]. Сетка представлена большим квадратом и 4 малыми квадратами. Каждый квадрат имеет 25 точек. В зависимости от размеров измеряемого объема и задач исследования используют большой и малый квадраты. Подобрав соответствующее увели­чение, приступают к измерению объемных соотношений в тканях. Для этого учитывают количество точек окулярной сетки, случайно совпадающих с изучаемыми структурами. Рекомен­дуется накапливать итог для площади, соответствующей 4 квад­ратам. Тогда общая учтенная площадь препарата соответствует 100 точкам (25x4), а части, приходящиеся на гистострукту­ры, — числу подсчитанных для них точек (последние выражают­ся в долях единицы или процентах). Для получения точных данных измеряют до 40 квадратов (1000 точек). При неболь­шой вариабельности показателей в каждых последующих 4 из­мерениях число оценок можно уменьшить в соответствии с рас­четами, приведенными выше, для обеспечения 95% уровня безошибочного суждения.

Окулярные вставки мож­но изготовить в любой ла­боратории. Для этих целей рисунок соответствующей вставки переснимается на фототехническую пленку (Микрат-200, Микрат-300, КН-1 и др.) на таком рас­стоянии, чтобы его величина на негативе составляла 80% диаметра окуляра микро­скопа (8 мм). Из негативов контактным методом получают по­зитивные отпечатки на такой же пленке, затем вырезают кру­жок с сеткой в центре и вставляют в окуляр микроскопа на его диафрагму [Автандилов Г. Г., 1972].

При получении исходной информации для морфометриче­ского и стереометрического анализа проводят большое число замеров или подсчетов изучаемых структурных компонентов тка­ней. Этот процесс можно упростить с помощью регистрирующих устройств, роль которых в простейшем случае может выполнять, например, интегратор, используемый для подсчета лейкоцитар­ной формулы крови. В этом случае каждой клавише счетчика приписывают в заданной последовательности значения классов: размеров, числа анализируемых структур и др. Результаты за­меров не записывают, а регистрируют нажатием клавиши счет­чика. Это позволяет параллельно с замерами сразу получить сведения о частоте каждого признака анализируемой структуры, составляя одновременно и вариационный ряд.

Если на одном уровне иерархической организации гистоструктуры определяют величину большого числа ее структурных составляющих либо находят ряд стереометрических характе­ристик одной структурной составляющей, то работа с микро­скопом оказывается непродуктивной. В этом случае рекомен­дуется проводить исследования на микрофотографиях (позити­вах и негативах). Микрофотографии проецируются на предмет­ный столик фотоувеличителя (рис. 14), на экран аппарата для чтения микрофильмов, на обычный экран при использовании проектора. Перед съемкой препарата рекомендуется провести первоначальное копирование объект-микрометра. Вставив в ма­газин фотоувеличителя фотопленку, на его предметный столик проецируют используе­мую линейку объект-микрометра, которую перерисовывают на лист белой бумаги. При этом цену деле­ния объект-микрометра можно увеличить, до­полнительно разбив каждый его интервал рядом параллельных линий с равным рас­стоянием между ними. В последующем на по­лученную таким обра­зом измерительную ли­нейку (сетку) проеци­руют кадры фотоплен­ки с занятыми гисто­структурами и прово­дят замеры. Замеры значительно упрощают­ся, так как линейка (лист бумаги) легко перемещается по пред­метному столику фото­увеличителя. На фото­пленках можно прово­дить и планиметриче­ский анализ, используя в качестве тестовых ре­шеток различные сетрешеток и степень уве­личения микроскопа не имеют существенного значения. Наи­более пригодны сетки с диагонально расположенными точками, расстояние между которыми не менее 5 мм. Таким же способом производят стереометрическое исследование электронных мик­рофотографий, о чем подробнее сказано ниже.

Краткое описание морфометрических и стереологических принципов показывает, что для измерений на гистологических препаратах морфологу требуются измерительные линейки, конт­рольная площадь для подсчета объектов, сетка контрольных точек для работы по исчислению объема, контрольные линии для оценки поверхности структур и др.

Многоцелевые контрольные системы, которые сочетают в себе поля, точки и линии, дают возможность получать разно­образную информацию о препарате с помощью одного и того же шаблона, установленного в окуляр микроскопа.

При стереометрическом исследовании, например, применяют квадратное поле, содержащее 21 линию постоянной длины Z в 7 параллельных рядах на равной дистанции, в силу чего расстояние между концевыми точками линии также рав­но Z в любом направлении. Имеющиеся в шаблоне 42 концевые точки Т (р) образуют равностороннюю треугольную сеть и могут быть использованы в качестве контрольного теста для точечно­го подсчета объема структур [Weibel Е. et al., 1966]. С таким шаблоном каждая контрольная точка имеет абсолютное значе­ние площади.

Эта контрольная система позволяет также определить отно­шение поверхности к объему и среднюю толщину микрострук­тур.

Указанная контрольная система заключена в квадратную рамку, стороны которой равны 62. Эта рамка определяет конт­рольную площадь Ат для подсчета количества Ыд. Часть срезов на контрольной площади используется для определения коли­чества структур в единице объема Nv. Таким образом, с этим шаблоном можно произвести почти все измерения, описанные выше. Контрольная система вкладывается в окуляр микроскопа.

При изучении объемной плотности редких компонентов в ци­топлазме можно использовать двойную контрольную систему решеток, как показано на рис. 15,6. Она состоит из квадратной сетки с постоянной решеткой С, в силу чего каждая 5-я линия толще, чем средние линии. Точки пересечения всех линий имеют значение площади с2, т. е. планиметрически каждая точка представляет одну маленькую площадь с2. Толстые линии сами по себе включают площади полей (5с)2. Значение поля, ограни­ченного пересечением толстых линий, таким образом, равно 25с2. Относительный объем редкого компонента s в объеме ци­топлазмы Vc может быть получен посредством подсчета коли­чества Ps пересечений, падающих на объект 5, и количества Рс пересечений толстых линий, падающих на цитоплазму.

Принципы, описанные выше, применимы только к тонким срезам. Ограниченная толщина среза будет приводить к опре­деленной систематической ошибке, которая зависит от отноше­ния толщины среза к значению «диаметра» исследуемых струк­тур. Однако этим можно пренебречь, если отношение значи­тельно меньше единицы.

Распределение образца в ткани является важным фактором в снижении статистической ошибки. Первоначально было пока­зано, что даже распределение срезов образца в органе может быть достигнуто путем наслоения взятых наугад образцов. «Случайность», требуемая теорией стереологии, еще сохраняет­ся, если нет совпадения между контрольной сеткой и любым ти­пом организации измеряемой ткани. Если некоторые структуры имеют предпочтительную ориентацию, то необходимо повернуть контрольную систему, например, на 90° или дважды на 60° и сделать 2 или 3 отсчета.

Размер образца можно увеличить, исследовав большее чис­ло срезов, сделав больше замеров или повысив плотность конт­рольной системы. Так как мы имеем дело с многоступенчатым отбором образца, первый шаг принесет наиболее интенсивное улучшение, а наименьшего эффекта нужно ожидать от простого увеличения плотности контрольных точек.

В экспериментальной работе особое значение имеет образец «нулевого порядка», т. е. контроль. Число контрольных наблю­дений животных зависит от задач работы.

В заключение подчеркнем, что стереологические методы обеспечивают достаточную точность количественных данных о внутренней структуре органов, тканей и клеток, хотя требует­ся особая осторожность, чтобы избежать систематических оши­бок в результате дефектов подготовки ткани.




© Авторы и рецензенты: редакционный коллектив оздоровительного портала "На здоровье!". Все права защищены.


 
Текст сообщения*
Защита от автоматических сообщений
Загрузить изображение
 

nazdor.ru
На здоровье!
Беременность | Лечение | Энциклопедия | Статьи | Врачи и клиники | Сообщество


О проектеКарта сайта β На здоровье! © 2008—2015
nazdor.ru, nazdor.com
Контакты Наш устав

Рекомендации и мнения, опубликованные на сайте, являются справочными или популярными и предоставляются широкому кругу читателей для обсуждения. Указанная информация не заменяет квалифицированную медицинскую помощь, основанную на истории болезни и результатах диагностики. Обязательно проконсультируйтесь с врачом.

Размещенные на сайте информационные материалы, включая статьи, могут содержать информацию, предназначенную для пользователей старше 18 лет согласно Федеральному закону №436-ФЗ от 29.12.2010 года "О защите детей от информации, причиняющей вред их здоровью и развитию".